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文檔簡介
第七章基因結構與表達分析的基本策略StrategyforStructureandExpressionAnalysesofGenes主講人:羅志勇教授11.DNA雙螺旋結構發現(Watson
&Crick,1953)概論TheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine19622PresentationSpeechbyProfessorA.Engstr?m
Dr.FrancisCrick,Dr.JamesWatson,Yourdiscoveryofthemolecularstructureofthedeoxyribonucleicacid,thesubstancecarryingtheheredity,isofutmostimportanceforourunderstandingofoneofthemostvitalbiologicalprocesses.Practicallyallthescientificdisciplinesinthelifescienceshavefeltthegreatimpactofyourdiscovery.Theformulationofdoublehelicalstructureofthedeoxyribonucleicacidwiththespecificpairingoftheorganicbases,opensthemostspectacularpossibilitiesfortheunravellingofthedetailsofthecontrolandtransferofgeneticinformation.
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CentralDogma2竿.中沖心冒法猜則傅提饞出(C漂r封i吉c滅k,1趙9泳5稻8)C匪r族i味c浸k射,性1芹9殃1聰6宏-喚2憂0灣0啞44反扣轉酬錄亮機書制雷闡碰明(T業e柏m詠i餐n1形9帥7棚0)補充的中心法則5中柴心船法凝則勿:代甘表拍了甲大置多閱數恐生姿物冰遺墻傳頓信談息邊貯關存般和屈表黎達欲的墾規夢律維,奠瘦定綢了襯從帶分紛子棕水橋平怪研畫究澆生流命福科惹學濕關廳鍵積問吐題妥的盒理手論敬基鐵礎吊。63.基因表達(geneexpression):
從DNA到蛋白質,通過轉錄和翻譯,用基因的遺傳信息在細胞內合成有功能意義的各種蛋白質。74肌.基擋因效結濕構隔與科表爛達神分梯析技付術權:Northernblot※Real-timeRT–PCR※基因芯片DNA序列分析※Southernblot※FISHDNARNAWesternblot※
蛋白質芯片蛋白質8講漫授饅內互容認:(Ⅰ)D共N纏A序代列輸分脊析※(預Ⅱ策)核疏酸票分娃子愉雜是交※(Ⅴ)聚窯合尚酶惱鏈蹦式減反難應※(Ⅲ)基皮因房誠芯導片保和主微窮陣百列(Ⅳ)W監e沾s輕t染e飾r或n免象疫勺印嫁跡※9(幸一水)雙相脫代氧紋鏈躺末例端津終燥止岸法※(伍S謙a嗚n仆g鐵e沿r墓,宣1到9孤7膨7象)(賭二議)功化臣學嫌裂頁解君法(碎M愧a瞞x參a誓m&G徑i堆l辨b虎e非r媽t咬,張1藥9慚7棚7串)(悄三瀉)D申N鏟A自抽動鏟化紡序敵列障分且析一賣、D叔N般A序信列外分局析1脫0D烏N票A測炸序隙技輩術之基職礎傘:
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高分辨率變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)技術
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PAGE能分離長度為300-500個堿基,差別僅1個堿基的單鏈寡核苷酸DNA片段。1清1(棍S抗a惹n飾g勁e樸r,肆U奮KM卸a競x匪a雀m&G錦i竊l濕b陵e堂r郊t,監U喬S蹤蝶A遵)共丑同末分盛享N駁o渴b按e墾l化準學漂獎(咬1耀9找7壇9吼)1慮2(一草)杰雙屋脫軍氧聽鏈泳末余端貿終或止第法(d那i缸d曉e挽o銳x冒y色c付h山a宅i襖n曬t酸e漏r此m免i臂n勿a曠t渠i轉o噴n)以D處N萌A合襯成反奏應漢為終基鮮礎扶。(闖S皆a慨n迷g案e戒r譜)1朋3A芳T冶P、d令A臣T港P和d鬼d轉A店T厭P的懇結劉構ATPdATPddATP1漆4
DNA合成反應摻入N個核苷酸摻入N+1個核苷酸1扒51.雙脫氧末端終止法原理
DNA合成反應中,ddNTP不存在3′-OH末端,故不能與下一個核苷酸的5′-P端形成3′,5′-磷酸二酯鍵,導致DNA新鏈的延伸提前終止于ddNTP
。1認6
末端終止部位DNA單鏈模板引物延伸的新合成鏈摻入ddNTP1枕72退.哪D餓N勿A測堆序選主暴要仗步穩驟●變性聚丙烯酰胺凝膠電泳●單鏈DNA模板的制備
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DNA模板與測序引物退火●摻入法標記反應●延伸-終止反應●放射自顯影●閱讀測序結果1哄8測城序疑步碰驟1除92佳0G反兵應喊管A反應管C反應管G反應管T反應管2杰1G賞A歡T熊C2砌2
與末端終止法不同,化學降解法是建立在對原有DNA的化學降解過程基礎上。
(二)化學裂解法2彩3
將待測DNA片段3′或5′端進行同位素標記,標記的DNA片段分成四個反應,分別用不同的化學試劑處理,造成堿基特異性切割,使DNA片段分別于某一種堿基處斷裂。1.化學裂解法原理2歌4化貍學艦降枯解G反吧應碑模際式代圖硫酸二甲酯哌啶M臉e嬸tM滅e窄tM籠e忠tM廁e意t2授5(衡三慘)D塔N毛A測棋序弄自沿動尊化膛原滿理采喇用4種因不棕同業的腫熒賺光沸分剩別飯標桂記4種d押d蕉N賭T謙P終壁止柏反套應臨產煮物滲,烏替迫代盞放叼射倚性臘同脾位罪素晚標幻玉記屬是紐奉實毒現D碑N興A測賞序認自屢動紛化滅的蕩基張礎濫。2亮61騙.驚D名N眼A自濁動落測放序禿步太驟勸:4種搶帶莫有放不醫同考熒搬光拼染付料捧標歪記鞠的惱終堵止蜜物d踐d褲N仰T異P陽sS西a翠n搖g晨e懇r測孤序婆反愚應反遷應持產慈物眠毛媽細柏管籍電收泳謝分踩離2素7熒駱光紅信爹號克采支集望、奏計該算黑機泰分擺析桂與D輩N揚A自給動售排百序。激收光何激喪發滲不迅同義大趙小D掛N籮A片產段橡上糧的粱熒鮮光泛分相子陳,乳發貪射躁出楚四休種兔不癥同罵波糖長爹的烘熒釋光2莫82洪.危D匯N戲A自稠動滴測畜序介結拔果2墨9(皇Ⅱ姻)核細酸怒分愚子瓣雜礙交N遙u富c進l下e尤i宰c鹽A沸c家i剃d暖H奔y超b帖r眾i怠d靜i破z完a錢t法i怪o穩n3惕0●細志胞紡原皮位包雜例交(P指a接r捐d塵u令e適e顯t渴a院l,1宮9澡6廳9豆)●S船o悉u累t捉h皇e鋪r拌n印櫻跡瞧雜擊交※:檢纏測D線N遭A(S流o少u青t森h伏e販r幸n代E裙M,1渴9皺7名5)●N奴o漏r范t普h內e濤r牲n印辟跡脆雜螞交※:檢刪測R皺N協A(S佩t琴a蟲r壤k辮G情R,1熊9擁7個7)核師酸間分歷子脾雜律交類技演術貨的歌建伯立3慢1核底酸巷分描子該雜斧交餓原糟理標渣記賺的單獅鏈單核挺酸國探斥針與銅待凳檢閣測似的番靶酒單扛鏈D贊N向A或R錦N扣A局公部棍互竭補氧結棕合雜形峰成濾雜犁交恥雙痕鏈督。應儉用燭:核僵酸晚靶D般N未A或R劣N帝A序妥列彩的劍定培性靈與抹定股量婚分田析仆。3翼23彎3一茶、S邁o丙u莫t跡h釘e白r陷n印娛跡噸雜女交(鼓S功o團u億t醉h捎e紹r嚼n給b煎l捉o池t知h墓y砌b楚r毀i具d敗i妨z墨a鑒t否i厭o繞n圾)將等電吊泳幕分遣離治的待是測D孕N鑄A片李段聚結告合快到境一暫定敞的間固列相溉支膨持睜物宇上速,貫然孝后霜與撤存巖在合于辛液待相省中尺標錢記止的計核置酸許探弦針武進翠行敗雜問交罪的槳過鳴程望。3游4PaperTowelsSouthernBlotting1t近i恐s阻s仰u磁eS思D恭SP社r汁o賀t造KP蜜h江e坡n屋o片lC父h給l薦o串r崗oE膛T熔O汽HS吩p是i站n3女5AgaroseGelElectrophoresis_+33非6二繪、N繁o腐r吸t頓h劇e兔r鑒n印尚跡藏雜掙交(搬N阻o挽r謠t欠h厘e比r宿n鞠b勾l匙o鏡t套h丹y矩b具r熱i愧d置i水z充a榨t在i疤o突n冠)指挺將R僅N頃A變岡性輸及測電蘿泳章分音離超后嘆,編并講轉好移碗到術固劈燕相旗支夫持宣物甘上敏,天用典雜液交渾反紋應扮來洞鑒假定質其釘中特晴定m吼R領N海A分轉子橡的夫含喝量曲及介其沒大躺小魂。3澡7R茫N撓A瓊滿脂輔糖脅凝指膠陶電枯泳3kb0.4kbNt36382604623N描o漆r級t稍h協e邁r紐奉n珠b懇l兼o襪t崇h企y既b屑r廁i耕d摟i冶z此a保t基i觸o論n28S18S應門用青舉誤例3狀8GAPDH0d2d4d6d8dN誰o秤r賣t踏h墳e泡r流n子b株l郊o冶t雜鬼交仆分右析m校R筆N道A的訪表達靶m研R忽N壇A3還9三南、策其桿他惰雜求交檢技為術(一)斑精點府雜以交(勞d鈔o盆t適b但l榜o攏t泥h績y眨b昨r仇i喇d呀i擱z筐a較t畜i隊o趁n):將R都N務A或D話N敘A變購性殲后波直逆接須點仍樣傻于數硝遠酸荒纖過維撕素蔑膜愧或躁尼總龍蘋膜響上箱,用促于千基塞因侵組襪中度特例定加基繡因妻及煮其項表惜達曲的懼定佛性隔及責定爭量態研醫究業。●●●●●●4臨0(容二民)準原東位晝雜冬交(i她n杯s薯i多t嘉uh脖y根b朝r掛i講d鏟i鉤z努a苦t介i鐮o漸n)用嬸標警記時的撐核繼酸上探崇針匹與競組壓織遭切竹片優或掌細亦胞作中哄的圈待碧測蛇核調酸徐互壞補斃序駛列夫雜吊交縫,魂可姓對玻核饑酸煩進軋行厭定芳性技、計定舍位滴和婦相飯對歪定男量坐分攝析么。4蕩1(燒三鋼)識液疤相均雜遷交(歌s怖o錦l桿u史t皂i認o貿n藏h衡y頭b貧r坊i專d艦i員z曬a龍t顧i閃o耽n尤)1.編核攝酸犬酶S佳1保蜂護紫分巧析孟法(所n剛u臭c旱l芝e繼a讀s弦e飾S中1鍛p竹r回o句t輩e虧c罩t疊i屯o今n姐a士s稱s先a督y)單勁鏈D照N乒A探丸針商與護待勞測R虛N吳A形昏成D妙N惰A陸/抗R用N化A雜旱交胡雙娛鏈付,其加合入華核忍酸頭酶S寫1專畝一淡性爽地所降逗解你未落形味成鏡雜劇交尖體境的D粱N序A或R首N叢A單坦鏈稈,D找N紅A平/飽R罷N尋A雜搞交培雙曲鏈缸則帳受促到章保讓護坑而旺不源被喘降即解微。4股22.R棒N和A酶撥保愉護懲分削析墻法(R飽N峰a養s過e盟p遍r寒o搶t祝e然c隊t虧i綁o堵n贊a禍s雄s探a獲y,R肝P鬼A)4霜3R翼P似A基賄本豬程鉛序拉:●待摔測R駁N厭A的巖分每離●體授外輝轉誰錄廚標忘記R暗N次A探膝針●待瓜測R薪N慨A與悠探加針R除N挑A進椅行僚液捕相妨雜運交●R饅N址A酶械消噴化●不卸同竊大律小簽雜長交代片底段底凝騾膠袖電泛泳哨分捏離4丙43騙.抑嶼制存消范減扣雜疫交娘原聰理(s鞠u求p揭p芹r編e熱s安s搏i肌o蔬n敞s鐵u糟b逝t廁r惡a楚c閥t盜i盯v騰e恒h蒙y塘b哀r韻i沙d視i碧z墊a占t差i袋o皂n,S帖S溫H)以仿雜龜交忽為花基雅礎屬,毀并小與P陪C努R技千術俱結挑合刪的c界D徐N增A消明減鑰雜德交世方抗法慎。應做用案:差幟異銳表庫達宣新慕基邁因純的劃篩模選至與愈克買隆筑。4硬5S俗S萍H原澇理4艱6c渴D勇N鍋A傍C弱h顆i聞p痕a凡n粥d擦M闖i天c節r霉o罰a謎r授r察a濱y(Ⅲ)基燈因愛芯屋片澆和摘微攪陣壤列4狗7●基棋因姻芯緒片筐上班的粥陣纖列閑是埋由身有福規讀則腦排罵列紀的c害D崇N杰A或欺寡壓核弊苷究酸派等植樣節本眉所瓶組電成噴的徑。●基夏因私表牢達刪高蜜通收量胃分恐析戀法。4膏8D禾N籌A微膀陣鞏列炮:●c志D社N用A微仰陣啦列許(c根D糕N鈔A挺m戀i惠c沿r你o寄a殘r押r塊a角y)●枝寡蕉核曠苷勺酸耳微謝陣淚列潔(o惰l激i財g起o暗m欠i羅c企r鑰o槍a萌r驗r疤a均y)4吩9c伶D創N著A微德陣膚列:在麗一言微遲小各的尖基顏片沖(染硅潑片桌等波)咸表稼面紅集期成車了尊大家量居分走子生識砌別塑探杏針宅,蒼能趙夠窮平矛行肌分鏡析秩大索量次基姻因周轉酸錄悲表園達餐,毅因逆此昆又邪被犁稱皂為c孕D亮N榜A芯糠片燈。5聞0基因表達譜芯片主要技術流程:樣品熒光標記芯片制備芯片雜交芯片洗滌和掃描掃描圖像分析1曠0曉25伙1核炮酸份雜棍交碰技瘡術蘭和枕微桿陣里列遠芯鬼片克懶隆D殃N叼Ac繩D宵N測A標碼記陣國列(紀A完r邪r塘a妹y仗,史M末a砍c艦r紛o翁a哲r忌r稿a鉛y你)雜筐交仙、序顯案影高觸密柏度微尾陣濁列(凈M廉i期c宣r怨o倍a能r華r貸a置y弊)1爸0色35笑2CBAC霞y舅5震-標削記c兩D暫N羽AC痰y焰3寄-標刊記c炮D浩N血ACBACBACBACBACBACBA樣冷品1樣神品2C無y新5她/尾C跑y蓋3熒知光濃標曾記R族N寸A提層取競克爭疾性既雜真交振顯弱示基樓因勞表揉達故量攜差鳳異二種樣品競爭性雜交示意圖基因表達譜芯片的原理1解0誕45婦3生燃物側學逗問酬題肉提沾出難,堪表危達耗基剪因灘分勸析偷,州樣腔本利分掠類蓋與自實的驗躺預監測.實怎驗這設藏計基射因鴨芯元片擱實獸驗圖籍象雪分予析結洪果鄙標照準項化基例因睛表礦達獲譜憶芯立片譯研幫究綠應其用桂思汽路1沙0窗55晨4某析些殲基銹因軟表董達肉異私常窗或番存付在規差油異生芽物事學乒確蹤蝶證刻和辯解氏釋貝分狹析下擠一凍步惠實池驗應設誼計5終5●
cDNA芯片可定量監測大量基因表達水平,闡述基因功能,探索疾病原因及機制、發現診斷及治療靶基因等。cDNA芯片在醫學中的應用●Northernblot或RT-PCR驗證。●基因表達數據的生物信息學分析。5漢6(Ⅳ)W恥e劈燕s允t插e膛r裁n免轟疫宰印丘跡W誼e云s溉t形e篩r妖n座b蓋l息o割t原施理稼與晉核腹酸闖分姓子旦雜餐交單相術似喉,站只病是老以座偶數聯蛇標當記攻物跡的被抗閱體陳分刪子偽作膚為鈴探促針愛,著檢偽測嚷轉村移義到評固廁相心支隙持挺物怪上惕的元蛋僅白習質裳分系子攜。5咸75肚8W甩e獸s尺t進e斃r潮n塊b爭l李o扎t程松序描:●蛋嘉白六質媽樣脖品集制薪備●S糟D閥S質-叢P萍A仔G民E分既離●蛋柏白刊質明轉寒膜●標簽記突抗蹈體轎與廣膜艦上術蛋歇白央質正抗去原疾雜賢交●檢搜測阿并記分闖析漏標疲記漂物鋪信桃號5戒9W騾e胳s吼t賄e戶r么n免撈疫歌印皮跡立信唐號燙檢濫測擋原霞理6喂0L妨u顛m叔i行n節o腿l化膠學霜發紋光漲原禁理6鼻1另夸一遍種責信跨號說顯喊示前方陳法括是治在制洗銳去怕一司抗棕后迅,炒加搖入勁堿烏性臉磷姿酸題酶便標占記繩的撒二磨抗貝,顫再葉用B遙C欄I騾P/N圓B炮T在普膜限上繭直短接糧顯暫色項。6堂2免攪疫屈沉臂淀膚技漫術是去一菊種島抗堂原崗抗鉛體膊反撐應透技梢術李,睛只綁是今將正抗雄體丹分特子全先敢結隱合料到送固劉相裕載影體艙如撈磁鹿珠良上忘,缺然失后泊與絨含剩目侵標偷蛋著白斯的勺細島胞滴裂字解奏液倚進宅行均液含相槽雜竿交把反躲應業,甜利錄用兆磁冊場藍或社離繳心凱等批技拘術怪將徒結棕含年在鈔抗亂體快上茂的霧蛋忽白梁質鈔收啦集杰起清來芬,超電泊泳局分棵離喊,孔用償于W喇e糞s吳t逃e貪r瘋n雄b爆l早o犬t分現析鎖。6錢3(Ⅴ)聚賭合的酶匪鏈港式狀反府應P誓o牧l困y騰m搞e取r利a枝s果e滲C級h斤a巷i顫n眉R渴e惕a夏c姜t卡i斯o倚n6杯4引拾言●P梢C釀R技表術曬發矩明(1希9繞8部5,M謀u些l哄l擋i流s涂K萍.)●P量C狡R及航其皇相駁關街技筍術發殖展漁速紐奉度收驚宜人桂、應識用訴迅均速庫廣顧泛(票分盜子帥生章物志學勿、鴨醫皺學昂、梨生右物回學故、趕考喂古仆學配等列學認科酬領衰域較)●獲N輝o刑b雞e晨l化痕學內獎(1咸9液9邪3,M著u愧l論l但i季s寧K戒.)6辟5講脈授解內短容物提明要:一慘、P摧C庫R技療術頌原昏理二戲、裙耐餡熱D讀N割A聚蘭合銷酶三稈、P誤C殺R引箭物退及松設地計油原流則四蒜、P冷C峰R條暫件膛的滲優膛化五遺、P熱C奧R改族進啦技石術6躍6聚號合擦酶灘鏈叔式古反掃應(調P灑C遞R千)江:一鉤、P兄C戀R技斧術原原賴理
Mullis
K.
1985年發明的一種模擬天然DNA復制過程的核酸體外擴增技術。
TheNobelPrizeinChemistry19936約7D混N獨A復達制●半朗保亭留傅復坡制●半妹不燙連沒續住復屬制●岡逮崎咸片市段領露頭溜鏈隨橋從壘鏈6周8引林物拴的餓化辰學難本援質業是囑什紫么呆?單嘩鏈暑寡慈核乎苷咽酸D盆N丘A或R俗N變A片裙段翼。D足N醫A復殘制暗引刷物信:殿單漏鏈R鈴N狹A片愿段P腳C歌R引文物屢:臘單沒鏈D隆N井A片想段6盛9(瞇一紗)P怪C姥R基春本伐過鏈程1衛.順P錫C底R循惡環巖由吸三創步瓜組桶成映:①即變蹄性(d揭e花n泥a幅t科u填r肺a串t屆i惜o癢n)②桌退恐火(a懸n破n俗e捷a吐l侵i煎n填g)③牙延扣伸(e和x添t帶e句n姜s仰i蹲o帆n)7野0PCR原理低凡溫且退寺火高奮溫胃變餅性中梯溫柄延滅伸7涌1在獨模蓄板D請N異A、語引堡物升、4種d笛N嚼T羅P存鉗在束條中件胳下累,帽依裕賴D垮N仁A聚芒合束酶催嶼化鬼一腳對抵引說物心間青特要異D鋒N中A片盯段叮合紙成的稈體犬外恒擴密增歲技沾術產。2煌.P差C徑R定鏡義草:7飼23壇.嗽P攜C借R擴獲增安終籃產雷物碼大毀小:介斗于轎兩策條牙退碎火夜引飼物5夕′末堵端竟之水間閃的雙欣鏈D息N蔽A片皺段。7樓34下.什盾么銀叫浪引擺物生延宰伸佛產南物哈?比消兩塊引信物癢限嬌定盟區猴長俗的偽延爹伸凡產示物蠻。僅舍發砌生梨在造以杏原激始暢模多板D銅N堤A為風模年板憂的岸擴臟增鴨過發程投中,到以講倍握數延形祥式菠擴借增(絨2驢n類)。7稼4Y稀=部A(1帆+暴E)nY檔:擴蛋增憲產目物撫的目量A天:最肢初趙靶D手N惱A分吧子族數E摘:P窗C稅R擴緩增有效勢率n封:循封環密次域數5唐.刪P垂C饅R產合量當E=1炎0耽0%,芳A異=形1時Y莊=窄2n>鈔>礦2衰n(引竄物勇延轟伸柿產彎物班的斃量澤)7繁5P倘C截R燙t磁h淘e報r御m盾a莖l曾c鍵y課c遭l吳e紗rR代o車t道o掠r戰-Gene7裹6P磨C桐R產被物塑的瓊脂次糖縣凝牢膠怪電歇泳骨分前析7頌7(浴二瘡)前平端臺巧期唐與已平盒臺歐效誓應1傳.平蟲臺攝效遍應(p幟l臥a陰t鄉豐e昆a輛u竄e磁f向f霧e母c軍t)族:P么C裳R經態過始一兔定海數挖量理的擴循死環折后儲,D媽N陷A片橡段紋不鞭再君呈方指筒數慕累闖積島,暗而蛛是舞進責入層靜旗止膽期即碗平疲臺湖期。7準8PCR平臺效應7及92.平臺期影響因素:①引物及dNTP底物濃度降低。②酶與模板比例下降。實際應用提示:定量PCR應考慮平臺期效應,選擇最適循環次數。8僚0二情、淋耐輝熱D織N貓A聚賤合號酶(充三刮)歷高內保扁真湯的喘耐躺熱D罪N關A聚江合套酶(蛙二沒)T睡a蘭qD種N驚A聚老合梢酶(扒一略)P當C句R耐息熱D憤N啄A聚豈合破酶蔽的程發姓現8陪1(一飄)P個C導R耐壤熱D粗N漏A聚知合皇酶劇的底發少現2悼.T庫4與T賊7務D亮N錯A聚劣合昆酶:熱冊穩攻定僑性鳴差與。1殺.大丟腸偷桿盲菌D刊N該A聚父合伴酶ⅠK田l孕e佳n短o季w片久段:①熱排穩昨定磨性堆差瞇,銳不惡耐限高港溫襲。②反擇應馳溫擊度壘偏劑低艙,縱產鑰生些非吩特里異麗擴棍增謊。3媽.T錯a甜qD培N痕A聚釀合箏酶:實律現濃了P問C嚷R自素動斜化8趕2(旬二唇)T岸a阿qD曲N葡A聚壺合爪酶從驢嗜嘉熱便水蠶生街菌t嘴h枯e超r塑m蝕u賢s敞a惑q乎u懷a枯t囑i妻c庫sY宏T司-輪1株制中肆直唉接共分越離移出腹來庫。基桶因狀全俯長:補2序,燒4范9倘6右b是p編必碼堆蛋文白劍質:8導3臟2個A浸A伯,9慢4附k拋dC端桑結團構風域:5激′位→肉3悟′外行切待酶外活性N端泉結喉構拐域:聚犁合坡酶甲活蛾性HOOCNH28微31用.較留高嗓的解熱駐穩唇定摧性●9茄5棉℃的押半娛衰柱期:4傭0薯m賢i視n●最福適漏溫沾度:家7因2胸℃~8庫0確℃●催亡化胖反碑應速減率:1艷5姑0~3痰0竄0核酸苷就酸/秒/酶啞分夾子8婆4T宜a己qD特N汪A聚慮合兔酶六特析性末:●5徒′腦→面3辯′聚田合槽酶象活蠶性棋;●5總′呢→抗3催′外枯切攀酶恐活套性零;●逆壁轉長錄刷酶洪活味性寶;●較壺弱孕的趴非得模圈板蛾依掏賴巧性喂;●缺堂乏3綱′戶→貍5虛′外絮切烤酶鴿活曉性起。8拐52闖.無混機麻離戶子隨及師抑成制殼劑T浸a扛qD盾N炒A聚均合溜酶賊的仇活班性對M泥g2奪+濃渣度紹和辨單筍價娃離廊子綢(K+或N援H邀4+)揮的玻性斗質衣和脊濃絕度蓮較俊敏制感神。最慣適M慶g2傾+濃檢度:2歐m辭m對o講l旗/拴LK+濃嘗度:5傭0鋤m貸m斷o睬l煌/茂L8壟63魄.保刷真全性DNA聚合酶3′→5′外切酶活性核苷酸的錯誤摻入率T4DNA聚合酶+1/260000T7DNA聚合酶+1/190000Klenow片段±1/140000TaqDNA聚合酶-1/410008渴7如旦何鼓提趁高P止C帶R叢D些N連A聚然合攜酶后的昂保久真判性遵?①冶使通用T援a肥qD舍N煤A聚京合妻酶云時蝦,摻蛇入闖少時量棋具滑有3孝′辜→潛5參′外屑切摩酶晃活密性群的堵耐講熱D探N杰A聚妹合洲酶,錯店配諒率瘦可漏降漁為比原遼來伏的1沒/般1愁0;②狀使四陡種d悠N迅T弊P底晨物寨濃爭度政相天等;③M查g披C毫l2濃鹽度古盡耳可額能和低蒼;④減播少判循蛾環臭數劫。8旋8(報三繪)恩幾綠種錢高虹保聯真料的冷耐揀熱D塵N芽A聚柱合杠酶1泥.T利t慘hD殃N針A聚火合宵酶2玩.V焰e振n統tD雙N煤A聚率合猴酶3串.P周f軋uD丸N紅A聚座合估酶8揀9三鉤、P幻玉C錄R引趟物嚴及符設怒計度原業則(篩一慣)示引頌物蔑設拾計槐原籮則(傭二怖)取引缸物六用忍量續計感算9笛0(君一疑)嬌引棗物痕設此計概原邪則引勻物序序申列模及罩其斯與扣模買板移特束異默性東結尺合是爭決夕定P丟C掙R反銹應調結違果農的主關儲鍵敵。9襯11.引滅物旁設榴計闊原凈則:①引奴物綢長焦度:嗚1酒0~3型0握N恥t②堿綁基貞分瓦布:紙A、T、G、C隨座機盾分狹布③G須+公C含更量:4奴0~6墊0叉%T肉m瞎=拼4揪(近G京+霧C植)每+斷2語(女A塔+還T詠)④引噴物謠之正間:芹避嘗免3闊′端狼互步補9稀2⑤引殲物皺自漠身:寧不健應堪形票成甜二形級舊結都構⑦引泥物5汪′末蘿端抖堿滴基:可華不醫與帽模塘板D逆N量A互約補⑥引零物3峽′末升端前堿凳基:誦最螞好敬選T、C、G,桌不飄選A9橡3引物5′端修飾技術附加核酸序列用途
限制酶位點克隆(如定向克隆)噬菌體啟動子合成RNA探針、測序蛋白質結合序列產物純化、檢測核糖體結合序列高效表達加錯配堿基造成突變定點誘變9講42.簡并引物(degenerateprimers):針對某一基因編碼蛋白的氨基酸區域設計的一組堿基序列不同,但有相同堿基數的寡核苷酸混合物。9表5簡綁并舊引攝物青設飯計練及應屈用搞:①筐對要純寬化者的堪未銳知南蛋幸白耀測赴定校一研段嘉短氨盟基箱酸振序服列穩。②不趁同齊物吃種侄某廈一第基匙因全編后碼駝的卡保吳守氨診基槽酸桶區箏域收。應冠用:軍基備于溪簡希并鐵引雀物P慈C悅R策梁略宏克扶隆新植基莖因9嬌63冠.引婆物貌設詠計可缺燙陷醒而壩引喬起蠶的柳后淺果9斗74擁.優摟化救的彈引蛙物地設寸計醉實聚例上姻游幅引受物丈序豎列秧:5扔′G總A許G蘿A槳A誤C澇A朵T株G求G爺T振G婦C捏G墻C寬A蜂G攜G兄T蛇T3洗′下徐游馳引射物委序棋列肅:5半′珍T斧G踢C呢C律C袋A令T珍C酸A諷T深C烏A恢T熊G在A味C錄C此T晌G芒G3趁′9嗓85挎′C削A杏G木T貌T虧A均A邁G柳G太G市G侵G居C郊A押G蓮G雅A頭G敬T尊G念G郊C班G敵C男T風G獵C軋T番C牙A頁C抗C餓T巴C眾T繞G勒G要T早G嘗C基C憂A烘A態A引G熄G凍G榮C專G籃G深C偏G全C廊A斤G規C塞G俯G惹C罪T免G嚇C規C駕G觸A罩G碰C購T克C蛋G躲G莖C靠C縱C當T樂G梁G護A怒G綱G擱C療G文G屢CA案G忘A白A夸C答A垮T竊G滔G蟲T值G故C蛙G切C邁A遲G形G頌T選TC屬T緣瑞T壇G索G孕T流G乎A縮慧C館C絹C坑T莊C困C問G旺G仆A裙T旦T促C查G留G貍C壤G番C燙G朗C現G輔T叉G某C暈G什G聯C巧C唉C樹G止C悅C察G案C微G德A恰G嘗T逝G候A微G洋G另G助T摔T撤T霉T零C像G攻T擺G朋G膜T草T棗C狗A算C弟A舊T妄C閘C并C挨G解C川G污G列C濕T頑C誰A令C迷G吩G毛G摟G董G借A聯G活T消G叨G辟G冰C兔A唉G拳C夠G香C勢C俗A氣G利G店G店G護C距G蹤蝶C農C束C猜G筐C考C阻G殼C鞏T若G劃T觸G難G駱C摟C肉C懼T承C冊G種T乞G守C完T幟G棟A旁T怨G甘C膠T慌A存C鼓T筋G功A懲G妹G客A賭G愉C德C唉A霉G鄰C言G胖T灣C筋T績A悉G毀G律G慰C即A象G盛C揭A滔G鑒C迎C肌G鐵C辰T夏T判C陰C灶T歸A犧G粗A到A鉆G趣AC跳C浩A顛G岔G逢T千C貧A扁T浙G牙A齡T柜G禽A儲T批G祥G漿G霧C父A回GC梯G憂C肉C摸C壘GG國G勻T鑒C副C萬A日G目T覽A顛C妙T株A完C潤T劃A植C冷C兩C靈G軍TA誤G堪T遲G反G饞C粗G禍G著A抄G飽C嘆T駕G烘C碼T磨G殊C口T機G運C銷T糟C共C蛇A敲C容G團G嶄C忠G改C敘G涉G夫A離G隨C吹C升C朋A湯A奇C時T六G阿C嘗G關C嬌C泰G肺A步C霜C渴C吹C3陳′9故91蘭A2抬6其0o帶l比i閣g著o潤D脂N微A≈3流3蘇μ救gN哄:引甚物堿壯基池數X:陪合捉成燦的o魂l怎i朝g胡o粘D攻N訓AA2劇6邊0單宮位Y:引祝物脊的p頌m腳o小l數1捧06Y(p膊m良o塔l)=狐X垂·棋3菊3耗×報─狠─3要3碌0悼.叛NX=─餡─煎×帽1躺05N(二)引目物蛋用罰量獵計念算1夏0蘋0四籠、P惹C經R條棚件爹的魯優巧化(一)T純a贊qD加N析A聚化合敵酶塔濃簡度域:1撈.皆0~2環.拐5首U椒/錄1訴0大0展μ狀l反駕應俱液(二)d皇N誘T心P濃貝度府:2梅0~2墨0洪0婆μ敬m憤o匆l搖/陡L(三)M化g2局+濃差度映:0爹.蠢5~2煎.耕5恭m穩m握o贏l括/詠L(四)引茄物潮濃壞度悲:0著.序1~0闊.冶5幸μ福m奴o振l什/隸L1穗0尚1P室C波R應冶用帶舉繪例①遺預傳飛病診匆斷旦:兇鐮混狀勉細無胞虹貧僅血β爽6哈G堂l錢u廢V異a租l(工G隱A專G塘G蒙U潔G逮)P觀C齊R擴顏增β帥6唐D香N球A區麗域②傳殘染爪病診末斷盼:H償B姐V和H箱I您V③腫蕉瘤邪分臣子農標館志診榆斷:爐b蒼c仁r槽-貼a矮b券lP藍M疼L智/禿R舊A傳R冬α④個院體師識鉤別:親脅子究鑒步定澇與藝刑套事易偵浙破⑤生動物考繳古1椒0游2五犬、P昨C售R改后進萄技脆術(緒一么)R殘T繁-嗚P攜C或R(讀r愈e包v炸e暖r即s途e摩t盾r被a伶n砍s頁c唐r判i烏p麗t吵i傅o繭n莊P拾C援R猜)以m乏R扶N揭A為低模秤板偉逆梳轉橋錄遞合李成c蒜D律N偶A,腎再僚以目此c愛D讓N通A為課模男板藥進宮行P微C中R反傲應。1慈0佩3RT-PCR原理1稱0糠4逆手轉翅錄款酶①A磚M澤V(a熊v煙i廊a禽n丟m命y幕e身l躍o禁b焰l教a絡s需t卡o滅s旨i喝s劇v漂i巧r鄉豐u事s)酶紙活損性肚最抽適霧溫掠度4因2剩℃②M弊M筆L休V(M形o飯l拾o缺n骨e方y餡m芒u哀r友i袖n隸e碰l落e腔u勉k監e配m浸i屑av舒i桂r蘇u咽s)濃:奶最室適侮溫萄度3惠7硬℃1始0碎5(野二瘋)定幟量R閱T薄-型P朽C遠R(Q趴R際T依-淚P鼓C泰R)P留C媽R擴奔增慮指比數角期旁內淘極棋小污的抵擴腫增繩效薄率沫改諷變誦會煙極畜大妙地您影惰響展產濁量敬。1綠.半荷定嶄量R遙T蹄-波P黨C法R以者樣委本m摔R氏N喪A為脫模串板脂逆申轉久錄資合幣成c野D泄N趣A,濃在上不柄同療引桑物平對粘引獲導閥下安共紅同P牲C爹R擴天增“堆看律家屆”留基丑因和目路的示基旁因c辱D麥N全A。1倆0右6①選差擇撫內葵對戴照派基框因組娛織河中旁普今遍率表地達坡、嗚表蘋達移量寸比軟較座恒撥定疫的棗“尖看莫家搏”認基煤因m筒R羞N介A。錘如G形A控P禿D背H和β拖-頂a倆c殲t柴i繡n計m寄R嫩N纏A等唉。②半辱定筆量城標義準計娘算P異C尖R產還物晃:靶c摔D救N漂A艦/液G里A每P籌D耗H違c絞D訓N躍A1名0哨7R描T香-獵P積C蔥R驗局證G輩-較R種h芒2誘冤導T甚N皺F香α而m敵R徐N殼A表給達涌上藥調25μmol/LG-Rh2
12h24h48h72h-+-+-+-+TNFαGAPDH③舉撈例1拘0洋82曠.巾R騾e方a輛l獲-方t賀i群m鎮e憲R少T嬸-塵P秘C港R原直理胖:P遠C慚R體聽系愿加再入鋪一喉種雙漫色與熒胳光膽標罪記捕的嶼寡刊核適苷化酸糧探腿針,所根悅據返探弓針翻上邀熒摸光振信衫號敢的泄變立化藍,癥計款算群模孤板D哄N險A的袖含晚量溫。1廁0雄9實殖時P拔C倡R應河用嗎:用方于國基迎因D爭N皺A拷園貝謎數腐和m正R免N妻A表揚達余定護量茫分援析質。1四1擠0定逢量諒檢咐測P貨C疾R產趨物長的奧指淚示墾系貼統:T燭a椅q范M友a酒n和M材o靈l闖e鞭c其u右l教a刊r蜜B由e氣a四c械o鄉豐n,林均即依賢賴熒勇光綢共但振母能太量窮轉刊移(f售l峽u羅o兼r咬e桐s懶c肆e棍n蒼c蝕e劃r亞e茂s舌o容n氏a按n途c狼e嶄e給n喇e怎r嗚g禍y霉t營r喇a歇n碧s帳f揭e糧r,F腥R君E精T)麗。1梨1爪1①T儲a班q黃M鎮a壁n爽P謎r陶o債b甲e●寡把核挪苷益酸艦探錢針的5扔′端吉標較記聾一欠個沒報鴿告均熒廁光凡染嫁料代(r熊e棗p例o醋r榆t伙e料r碑f拼l游u匠o目r庭e皂s旅c慘e度n尿c輔e什d章y覽e)場,3鵲′端須標袍記陷一仍個授淬糟滅站染圣料絕(q捉u猴e球n喊c吐h中e巧r血d幅y寬e)慢。1聾1欲2●當棕光魂源尼照杜射棍到銷探袖針亭時效,買被激噸發挪的超報啟告拜熒磁光磁染貪料將擠能爽量晴轉釘移停給嫂附萄近虛的淬爬滅殼染肢料而零不皂發跑光婆。1赤1攏31互1呆4RQ5’3’5’3’5’3’5’3’ExcitationRQQRQRExcitation雙并標念記壞探睛針候(T恩a璃q情m毫a龜n珠P凡r叛o胡b唐e)5建′5勤′5垂′3讀′3墻′1換1復5●當P嚼C哈R擴閃增分時拳,T庫a斜qD抱N遙A聚織合替酶牧遇
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