深部真菌(zhēnjūn)感染第一頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌(zhēnjūn)感染簡介定義:

由致病性真菌所引起的人體深部感染，如侵及到皮膚深層和內臟，如肺、粘膜、肌肉、腦、消化道等器官，危害性較大,稱為深部真菌感染。

類型:

目前，深部真菌感染已成為免疫功能低下患者發病(fābìng)和死亡最常見的原因。常見有念珠菌病、孢子絲菌病、隱珠菌病、曲霉病、毛霉菌病、馬爾尼菲青霉菌病、組織孢漿菌病以及球孢子、副球孢子菌等臨床病癥。黑曲霉第二頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染(gǎnrǎn)誘因誘發因素：(1)慢性消耗性疾病，如惡性腫瘤、糖尿病和尿毒癥等，可使機體免疫功能和抵抗力降低(jiàngdī)；(2)長期使用廣譜抗生素，敏感的細菌被抑制，消除了正常菌群中與真菌相拮抗的細菌，使真菌得以大量繁殖。有些抗生素可促進某些真菌的生長，(3)腎上腺皮質激素可抑制炎癥反應和纖維細胞增生，并可穩定細胞內溶酶體的膜，阻止其中酶的釋放，影響中性粒細胞和巨噬細胞溶解殺滅微生物的作用。(4)大劑量X線照射、抗腫瘤藥物和免疫抑制劑都能抑制骨髓，使中性粒細胞和巨噬細胞減少，機體的免疫功能和抵抗力降低。(5)治療用長時間靜脈(jìngmài)插管，留置導尿管和大手術，可引起局部損傷，成為真菌侵入的門戶，在機體抵抗力低落時在體內繁殖致病。第三頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌(zhēnjūn)感染的誘因免疫功能(gōngnéng)低下深部真菌(zhēnjūn)感染組織局部損傷菌群平衡長期使用廣譜抗生素大手術、內臟插管抗腫瘤藥物使用慢性消耗、免疫缺陷疾病長期使用腎上腺皮質激素X-R、抗腫瘤、免疫(-)某些內分泌失調：甲低第四頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染(gǎnrǎn)的特點1.不產生內毒素和外毒素，致病機理不明。2.致病力一般較弱，機體免疫低下時發生。3.感染(gǎnrǎn)菌種變化，白念珠菌感染(gǎnrǎn)下降。熱帶念珠菌，近平滑念珠菌，克柔念珠菌，光滑念珠菌等感染(gǎnrǎn)增多。4.真菌感染早期癥狀無特異性，往往被原發病掩蓋，病程長，發現較晚，死亡率高，《真菌感染病學》中寫到，真菌院內感染死亡率為90%。第五頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌(zhēnjūn)感染診治中的問題1.深部真菌感染發病率增加。2.誤診率高:1984年～1997年，醫院深部真菌誤診率30%，美國Muglistom1985年耳真菌病誤診率為90%。3.真菌感染與院內感染關系密切，美國80年代末真菌感染占院內感染的10%。4.危險因素多:年齡，腫瘤，移植，抗生素，激素(jīsù)等。5.抗真菌藥物品種少，價格貴，因副作用而難以預防用藥，耐藥顯現多。6.沒有指導臨床用藥的可靠指標。北京協和醫院真菌(zhēnjūn)感染病例分布圖第六頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染(gǎnrǎn)的臨床檢測1.G實驗：檢測(1-3)-β-D-葡聚糖的含量，判斷是否有真菌感染，耗時短，靈敏度高，特異性強。2.GM實驗：曲霉屬半乳甘露聚糖抗原檢測。判斷是否曲霉屬真菌感染。對兒童及接受造血干細胞移植患者、ICU患者不適用。3.真菌的抗原、抗體及代謝產物的血清學檢查和真菌核酸檢測（PCR技術）用于實驗室檢測，已成為(chéngwéi)這一領域研究的熱點。1.直接方法：是組織或滲出物中可分離培養出致病真菌。特點：耗時長,并由于大量廣譜抗生素的廣泛使用，其培養陽性率也是很低。2.輔助方法：臨床表現，免疫學，病理學，影像學檢查等。特點：觀察期不確定，費時費力，特征性不明顯，并對醫師的專業水平(shuǐpíng)要求高。傳統檢查非傳統檢查第七頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染的藥物(yàowù)治療第八頁，共三十九頁。編輯課件(1-3)-β-D-葡聚糖簡介(jiǎnjiè)第九頁，共三十九頁。編輯課件1-3-β-D-葡聚糖本質(běnzhì)及特點葡聚糖廣泛存在于真菌細胞壁中，占其干燥重量的80%-90%。其中(1-3)-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌細胞壁上的特有成分，其形式以1-3-β-糖苷鍵連接(liánjiē)的葡萄糖殘基骨架作為主鏈，分支狀1-6-β-D葡萄糖殘基作為側鏈。第十頁，共三十九頁。編輯課件(1-3)-β-D-葡聚糖特性(tèxìng)當真菌進入人體血液或深部組織后，經吞噬細胞的吞噬、消化等處理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可從胞壁中釋放出來，從而使血液及其它體液(tǐyè)中含量增高。當真菌在體內含量減少時，機體免疫系統可將其清除。在淺部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被釋放出來，故其在體液中的量不增高。對熱極為穩定，高壓121℃并不能使其滅活。在念珠菌和曲霉菌細胞壁中含量較多，對G實驗靈敏，而隱球菌(qiújūn)中含量較少，則需要較多的試劑才能檢出。第十一頁，共三十九頁。編輯課件(1-3)-β-D-葡聚糖

定量(dìngliàng)測定第十二頁，共三十九頁。編輯課件測定葡聚糖可以很快得到結果，指導臨床醫生采取積極的治療,及時準確的選用抗真菌藥物。動態快速檢測，不受血中抗生素和酶等的影響。所有真菌的細胞膜上都含有(hányǒu)(1-3)-β-D葡聚糖，而其他微生物、動物及人的細胞成分和細胞外液都不含這種成分，因此在機體的體液中檢測到(1-3)-β-D葡聚糖是診斷深部真菌感染的有效依據。不能確定菌種，但能肯定是否有真菌感染。指導臨床科學合理的使用抗真菌藥物。當檢測到標本中葡聚糖含量較高時，即刻予以系統治療，不必等鑒定出種屬。定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的特點樣品(yàngpǐn)來源：血漿，血清，腹水，尿液，腦脊液第十三頁，共三十九頁。編輯課件定量測定(cèdìng)(1-3)-β-D-葡聚糖的意義早期診斷：深部真菌感染增多且復雜，早期癥狀無特異性，往往被原發病掩蓋，病程長，發現較晚，死亡率高。因此對深部真菌感染治療成敗的關鍵在于早期診斷。快速診斷：真菌感染就醫的患者，往往病情嚴重，傳統的微生物分離(fēnlí)、培養與鑒定需要時間較長，患者在等待期間有可能病情加重，甚至死亡。指導用藥：快速確定真菌感染后，選擇好治療方案,有針對性使用抗真菌類藥物。為臨床選用副作用小，療效高，價格適宜的藥物提供準確的依據。評價效果：應用抗真菌藥物后，定期檢測血漿中葡聚糖濃度變化，評價選用藥物的有效性。監護病程：監護深部真菌感染易感人群的病發狀態。動態觀察：易感人群，臨床療效第十四頁，共三十九頁。編輯課件動態(dòngtài)濁度法原理凝固(nínggù)蛋白原凝固(nínggù)蛋白動態濁度法凝固酶凝固酶原活化因子C因子C細菌內毒素因子G活化因子B活化因子G1-3-β-D-葡聚糖因子B全過程2小時內完成，可及時提供結果，指導臨床第十五頁，共三十九頁。編輯課件定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的原理不同濃度反應體系引起不同的濁度變化，當透光率達到法線時，該時間的對數(duìshù)（LgTg），與葡聚糖的濃度（LgC），呈直線關系定量(dìngliàng)依據第十六頁，共三十九頁。編輯課件定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的設備(國內外現狀(xiànzhuàng))國外現狀(xiànzhuàng)國內現狀美國、日本等國均已出現專用的(1-3)-β-D葡聚糖檢測儀器及配套的檢測試劑盒，而且獲得美國FDA及厚生省批準文號，作為一種日常檢測項目。美國:ELx808?IncubatingMicroplateReaders日本:WellreaderSK603ToxinometerMT-5500MB-80微生物動態快速測定系統（金山川公司）首家獲得SDA認證普及面廣,影響大.國內獨創專利產品計算機軟件著作權第十七頁，共三十九頁。編輯課件定量測定(cèdìng)(1-3)-β-D-葡聚糖的設備MB-80微生物快速動態測定系統：主機反應器，數據處理分析軟件，計算機，打印機，電子恒溫(héngwēn)加熱儀等。生產商：北京(běijīnɡ)金山川公司第十八頁，共三十九頁。編輯課件國外檢測(jiǎncè)儀器及試劑日本(rìběn)生化學WellreaderSK603第十九頁，共三十九頁。編輯課件國外-日本(rìběn)日本(rìběn)和光トキシノメーターMT-5500

Β-GlucantestWako第二十頁，共三十九頁。編輯課件國外-美國(měiɡuó)ELx808?*IncubatingMicroplateReadersGlucatell?Kit(13)-β-D-glucanDetection第二十一頁，共三十九頁。編輯課件定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的試劑盒GKT-5MSet動態真菌檢測試劑盒：真菌反應主劑（用于各種體液中真菌檢測）及樣品(yàngpǐn)處理液（樣品(yàngpǐn)處理液的目的排除體液中存在的各種測定干擾物質）各5支。生產商：北京金山川(shānchuān)公司第二十二頁，共三十九頁。編輯課件定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的附件T01智能恒溫(héngwēn)儀真菌檢測專用真空采血管，采尿杯無熱原平底專用試管生產商：北京金山川(shānchuān)公司第二十三頁，共三十九頁。編輯課件MB-80的五大(wǔdà)特點生產商：北京金山川(shānchuān)公司快速(kuàisù)---2個小時完成檢測動態---動態檢測定量---定量檢測靈敏---內毒素最低檢測量1pg/ml(1-3)-β-D-葡聚糖最低檢測量5pg/ml

肽聚糖(PGN)最低檢測量20ng/ml檢測不受病人用藥影響第二十四頁，共三十九頁。編輯課件MB-80的技術指標靈敏度：最小檢出值5pg/ml精密度：批間CV<10%準確性：回收率平均75-125%標準曲線范圍：5-9000pg/ml相關系數︱r︱≥0.980檢測(jiǎncè)速度快：2小時內完成第二十五頁，共三十九頁。編輯課件測定(cèdìng)(1-3)-β-D-葡聚糖的參考值真菌定量檢測試劑盒GKT-5MSet(定量)(1-3)-β-D-葡聚糖臨床判斷(pànduàn)閥值為10pg/ml。檢測值判讀：10pg/ml以下：健康人值10-20pg/ml間：真菌定植病變觀察期20pg/ml以上：深部真菌感染，需采用治療。敏感性與特異性為100%第二十六頁，共三十九頁。編輯課件使用MB-80的臨床(línchuánɡ)評價取一份真菌性肺炎病人標本，重復測定10次，真菌葡聚糖的CV值為6.7%。用公司(ɡōnɡsī)提供的真菌葡聚糖標準品，測定5次，取均值然后計算相對誤差為21.8%。取真菌葡聚糖的標準品，按照公司提供的檢測范圍，從5000pg/ml開始做10倍稀釋，共稀釋5次，進行檢測，做直線回歸分析，相關系數（r）為0.901。北京安貞醫院感染科用金山川科技發展有限公司生產的MB-80微生物快速動態檢測儀進行了初步的性能(xìngnéng)評價：第二十七頁，共三十九頁。編輯課件使用(shǐyòng)MB-80的臨床評價北京安貞醫院感染科使用金山川公司(ɡōnɡsī)生產的真菌葡聚糖試劑和日本和光公司(ɡōnɡsī)生產的試劑，在MB-80微生物動態檢測儀上做試劑的比對試驗，結果見下表：第二十八頁，共三十九頁。編輯課件使用MB-80的臨床(línchuánɡ)評價關于真菌葡聚糖試劑的比對試驗--------------------------------------------------------病人細菌培養結果金山川試劑和光試劑--------------------------------------------------------65/M白色念珠菌86.284.676/M熱帶念珠菌36.233.522/F毛霉菌(méjūn)480.9476.675/M煙曲霉菌265.1235.481/M熱帶念珠菌31.536.278/F光滑念珠菌54.255.761/M白色念珠菌22.420.268/F近平滑念珠菌8.65.6--------------------------------------------------------第二十九頁，共三十九頁。編輯課件使用(shǐyòng)MB-80的臨床評價正常對照組血漿1-3-β-D葡聚糖含量(hánliàng)為2.83±2.57pg/ml；深部真菌感染組為54.06±36.13pg/ml。經t-檢驗分析，對照組與深部真菌感染組1-3-β-D葡聚糖平均值差異非常顯著（t=7.741,P＜0.001）。血漿葡聚糖檢測可在擬診早期為臨床醫生提供是否感染真菌的可靠信息，是一種實用的真菌感染早期診斷方法。第四軍醫大學西京醫院檢驗科MB-80微生物快速動態(dòngtài)檢測儀研究深部真菌感染患者血漿1-3-β-D葡聚糖檢測與臨床意義時發現：---------中華醫院感染學雜志,2005,15(3):354-355第三十頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染的病例(bìnglì)分析患者，男,41歲,因雙下肢關節疼痛1月余,發熱、咳嗽、痰血10余天于2006年9月12日入院.入院前曾予以青霉素抗感染治療,無好轉,隨后出現,體溫在39度左右波動,并有咳痰,痰中血絲癥狀.胸部CT檢查,發現左肺陰影。入院后9月18日進行支氣管鏡檢查及作病理活檢,顯示肺左上方葉管口真菌感染.診斷為侵襲性肺曲菌病.實驗室檢查:入院當天化驗血常規顯示白細胞10.1*109/L(中性粒細胞71%,淋巴細胞18.2%,單核細胞9.3%).血沉加快,C反應蛋白(dànbái)(CRP)和降鈣素原均升高.9月14日痰培養結果為陰性.9月22日再一次進行痰培養和血漿(1,3)-β-葡聚糖檢測,培養結果依然為陰性但血漿(1,3)-β-葡聚糖檢測為陽性(1806pg/ml).治療：入院后給予哌拉西林/他唑巴坦和西米替丁作抗菌治療,高熱未有好轉,隨后9月21日給予氟康唑靜點,高熱好轉,體溫在37度左右波動,以后繼續予以抗真菌治療,情況逐漸好轉,9月30日出院.第三十一頁，共三十九頁。編輯課件金山川(shānchuān)為您提供

的服務第三十二頁，共三十九頁。編輯課件測定(cèdìng)操作步驟我們每一批試劑盒出廠前經過嚴格的質量控制，并進行了方法學研究，節省了客戶對測定方法學的研究，客戶只需要按照我們的操作步驟進行，將結果導入我們提供的軟件處理數據即可。若客戶需要進行方法學驗證，我們提供合格(hégé)的標準品。我們可為您提供專業的培訓。第三十三頁，共三十九頁。編輯課件試劑(shìjì)的注意事項試劑盒出廠前已經過嚴格的質量檢測,禁止在有效期外使用。試劑盒為體外診斷試劑,應在2-8℃避光保存,禁止使用于人體。試劑盒在使用前應作仔細檢查,出現(chūxiàn)損壞禁止使用,以免影響測定結果。每次實驗應做質控品對照，具體過程參照質控品的使用說明書。實驗操作全過程都要避免使用金屬用具。第三十四頁，共三十九頁。編輯課件適合服務(fúwù)對象醫院：檢驗科，微生物室，免疫室，呼吸科，血液科，腫瘤科，燒傷科，器官移植部門，腎內科，ICU病房(bìngfáng)個地區中心血站，血液