文件編號：產品無菌檢驗操作規程編制 日期審核 日期批準 日期版號 生效日期公司文件編號文件編號×××××××××公司版本號作業指導書產品無菌檢驗頁次0×/×1目的2適用范圍〔列舉〕的無菌檢驗。3檢驗依據本廠產品注冊標準〔編號〕EN1174-1996〔2023〕GB14233.2-2023GB15980-1995儀器、設備菌棉簽、鑷子，試管架，大試管假設干等。無菌檢驗室的環境要求無菌檢驗應在環境干凈度10000級下的局部百級的單向流空氣區域內進展。緩沖區與外界環境、無菌檢驗室與緩沖區之間空氣應保持正壓，陽性比照室與緩10Pa。無菌檢驗18～26℃，相對濕度：45～65%。〔區〕懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標準進展懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的監測。每年至少檢測一次。無菌檢驗過程中應同時檢查超凈工作臺單向流空氣中的菌落數：每次操作時在層330～35481CFU/平板。無菌檢驗前的預備器具滅菌、消毒滅菌：試驗過程中與供試品接觸的全部器具必需承受牢靠方法滅菌。可經電熱121℃30滅菌。浸泡或擦拭。消毒劑應每月更換，以防止產生耐藥菌株。標識：器具的滅菌、消毒后必需做好標識，標明滅菌、消毒時間和使用有效期。人員、物料進入無菌檢驗室開啟紫外線燈或臭氧發生器進展空間滅菌處理，消毒時間不得少于30min。物料進入無菌檢驗室流程/緩沖間撤除后，傳入試驗室。消毒：進入無菌操作室的全部培育基、供試品等的外表都應承受適用的方法進展消毒處理，以避開將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗室。內。符合要求的經傳遞窗傳入無菌檢驗室。人員進入無菌檢驗室流程區工作服。洗手：首先用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水連續沖洗20凈泡沫。〔要求褲子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽子包裹全部頭發。5液可用洗必泰、潔爾滅、碘伏、75%酒精等。人員進入：經緩沖間進入無菌檢驗室。7無菌檢驗操作要求全過程必需嚴格執行無菌操作，防止微生物污染。使用玻璃器皿應輕取輕放，避開破損，以防培育物集中。塵埃微粒。使用金屬接種器具時，用前、用后均需灼燒滅菌。在接種培育物時，動作應輕、準，防止培育物濺出，產生汽溶膠，造成污染。操作過程中全部的帶菌物品，用后均應作消毒、滅菌處理。可在檢驗過程中隨用121℃30培育基制備需氣菌、厭氣菌培育基〔硫乙醇酸鹽流體培育基〕的制備所用試劑酪胨〔胰酶水解〕15.0g 酵母浸出粉5.0g葡萄糖5.0g 氯化鈉2.5gL-胱氨酸0.5g 配制的0.1%刃天青溶液1.0ml硫乙醇酸鈉0.5g 瓊脂0.75g〔或硫乙醇酸0.3ml〕 水1000ml制備pHpH7.1±0.2。硫乙醇酸鹽流體培育劑氧化層的顏色要求1/5，100℃水浴加熱到粉紅色消逝〔20〕快速冷卻，只限加熱一次，并應防止被污染。霉菌培育基〔改進馬丁培育基〕的制備所用試劑胨5.0g 磷酸二氫鉀1.0g酵母浸出粉2.0g 硫酸鎂0.5g葡萄糖20.0g 水1000ml制備pH6.4±0.2。還可使用按處方生產的符合規定的脫水培育基，依據使用說明書配制。12130制備好的培育基應在2～25℃保存，在3周內使用。培育基的無菌性檢查〔可與產品無菌檢驗同步進展。檢查時，每批5〔瓶〕14稀釋液、沖洗液的制備304℃保存備用。pH7.07.23g4.30g1.0g，1000ml。121℃304℃保存備用。10比照菌液制備無菌檢驗所用的菌株傳代次數不得超過5代。取金黃色葡萄球的一般瓊脂斜面培育物，接種一白金耳至養分瓊脂培育基內，在18～24h0.9%69.0ml0.9%氯化鈉溶液，在壓力鍋內經121℃30min1:101:1001:106〔ml≤100CFU〕即可。11無菌檢驗培育溫度培育。23～28℃培育。無菌檢驗12.1各項。放樣片進展無菌檢驗。菌片貯存〔REVEN15～27℃〕接種基和未接種的改進馬丁培育基作為陰性比照。培育48～7230～35℃7改進馬丁培育基于23～28℃培育7天。結果判定為合格。如產品注冊標準中明確產品應進展無菌檢驗，則執行12.2.1～12.2.5。抽樣樣。3～11供試液預備2依據供試品具體特性選擇以下方法：1ml10ml/min，收集到無菌的容器內。容器類器具：按容器內外表積每10cm2參與浸提介質1ml的比例，振搖數次。1ml，振搖數次。收集上述沖洗液或浸提介質于無菌容器中。接種薄膜過濾法：優先承受封閉式薄膜過濾器〔集菌器濾器。濾膜孔經不大于0.45μｍ。濾器和濾膜使用前應承受適宜的方法滅菌，或直接承受無菌集菌器。a、如承受封閉式薄膜過濾器，取一副三聯式集菌器，將供試液通過集菌儀過濾，使通過每只培育管的量根本均勻。然后通過集菌儀一只加120ml改進馬丁培育基，另兩只分別參與120ml硫乙醇酸鹽培育基〔其中一只做陽性比照，內加金黃色葡萄球菌液1ml另取一副二聯集菌器，用同批的沖洗液或浸提介質 120ml通過集菌儀過濾〔每只約50ml同法一只加硫乙醇酸鹽培育基120ml另一只加改進馬丁培育基120ml分別作陰性比照。b350ml〔包括輸液器、輸血器、注射器配套使用注射針。a120mgc、一次性使用的材料：拆散或切成小碎斷，接種于各管足以浸沒供試品的適量培育基中。中一份作陽性比照。10%，或培育基的裝量足以浸沒供試品。每管培育基的最低用量——15ml10ml.培育、觀看上述含培育基的容器分別置規定溫度的恒溫培育箱中，48～7214如在參與供試品后、或在培育過程中，培育基消滅渾濁，14培育液涂片，染色，鏡檢，推斷是否有菌。結果推斷全部供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經確證無菌生長，判供試品符合規定。以一次檢出為準，不得復試。當符合以下至少一個條件時，可判試驗結果無效；回憶無菌試驗過程，覺察有可能引起微生物污