實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌第1頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.自己動(dòng)手觀察鏈球菌、腦膜炎雙球菌的形態(tài);示教觀察結(jié)核桿菌、白喉?xiàng)U菌的形態(tài)。2.觀察腸道桿菌的雙糖發(fā)酵，鑒別培養(yǎng)基（ss培養(yǎng)基）的生化反應(yīng)。3.化膿性球菌的鑒定⑴三種葡萄球菌的色素觀察⑵乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察⑶抗“O”實(shí)驗(yàn)。第2頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四三、作業(yè)：1.鏡下繪出4種形態(tài)圖2.根據(jù)生化特性及產(chǎn)生色素，葡萄球菌分為哪幾種類(lèi)型？第3頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四實(shí)驗(yàn)四病原性球菌1.五類(lèi)病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性2.葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物3.血漿凝固酶試驗(yàn)--玻片法4、抗鏈球菌溶血素”O(jiān)”（ASO）乳膠試驗(yàn)示教 （操作，1人/組）示教示教示教第4頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四G+球菌：金葡菌鏈球菌肺炎雙球菌1.五類(lèi)病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性示教第5頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四G-球菌：

淋球菌

腦膜炎球菌第6頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2.葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物示教

普通瓊脂平板血平板

菌落形狀色素溶血性

金葡圓形凸起光滑中等大小金黃色+檸葡同上檸檬色-白葡同上白色-

表1第7頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四

血平板甲型鏈球菌針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)乙型鏈球菌針尖小菌落、透明寬大溶血環(huán)

巧克力血平板腦膜炎雙球菌菌落透明似露滴狀

表2

表3第8頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四血漿凝固酶試驗(yàn)：凝固酶分類(lèi)游離凝固酶：為分泌到菌體外的類(lèi)似凝血酶原樣物質(zhì)，被血漿中的協(xié)同因子激活而作用于纖維蛋白原使血漿凝固。（試管法測(cè)定）結(jié)合凝固酶：是一種結(jié)合于菌體胞壁的凝固酶，是一種纖維蛋白原受體，使細(xì)菌凝聚成團(tuán)成塊塊。（玻片法測(cè)定）第9頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四3.血漿凝固酶試驗(yàn)--玻片法（操作，1人/組）方法：

兔血漿兔血漿生理鹽水123金葡白葡金葡+++凝集（+）不凝集（-）不凝集（-）第10頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四4、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）快速膠乳法高滴度病人血清被適量溶血素中和了正常水平的抗體后，還有多余ASO，這些多余抗體即與SLO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。

（操作，1人/組）

原理：第11頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四

陽(yáng)性對(duì)照

陰性對(duì)照待測(cè)血清

各加溶血素“O”1滴輕搖1min

再加SLO膠乳1滴輕搖3min

觀察結(jié)果

方法：第12頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四稀釋度ASO（IU/ml）1：154001：308001：601600ASO≤250IU/ml陰性

結(jié)果判定：第13頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四注意事項(xiàng)：液體量要一樣，菌量一樣。血漿多挑幾環(huán)（一滴的量），菌少挑點(diǎn)，不能干。3.涂菌時(shí)間一樣，出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性，再涂凝集物可被涂散，變陰性。第14頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四腸道桿菌一、腸道桿菌的形態(tài)及染色性

二、腸道桿菌的培養(yǎng)特性

三、腸道桿菌的生化反應(yīng)特點(diǎn)

四、Widal實(shí)驗(yàn)第15頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四腸道桿菌的形態(tài)及染色片第16頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四腸道菌的菌落形態(tài)EMB大腸：菌落呈紫黑色，有金屬光澤。傷寒痢疾：菌落無(wú)色半透明。SSD大腸：大而不透明的紅色菌落。傷寒痢疾：中等大小淡黃色菌落。第17頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四大腸桿菌（EMB培養(yǎng)基）第18頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四腸道致病菌（SS培養(yǎng)基）第19頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四糞便標(biāo)本中致病性腸道桿菌的分離與鑒定

第20頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四生化反應(yīng)1——單糖發(fā)酵葡萄糖及乳糖發(fā)酵一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理

了解糖發(fā)酵試驗(yàn)方法

二）實(shí)驗(yàn)材料

1、菌種：大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌培養(yǎng)物

2、培養(yǎng)基：乳糖及葡萄糖發(fā)酵管

三）實(shí)驗(yàn)方法

１、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒桿菌分別各接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管中（方法同前）。

2、37孵育18~24小時(shí)，取出觀察結(jié)果。

第21頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四動(dòng)力檢測(cè)第22頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四菌名葡萄糖甘露醇乳糖靛基質(zhì)甲基紅VP試驗(yàn)枸椽酸鹽硫化氫尿素分解動(dòng)力福氏志賀菌++－－/++－－－－－傷寒沙門(mén)菌++－－+－－/++－+乙型副傷寒沙門(mén)菌⊕⊕－－+－－++－+大腸桿菌⊕⊕⊕++－－－－+產(chǎn)氣桿菌⊕⊕⊕－－++－－+普通變形桿菌⊕－－++－－/+++++常見(jiàn)腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別表

第23頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四斜面底部H2S初步鑒定++－非病原菌－－－非病原菌－++/－副傷寒桿菌及其他沙門(mén)氏菌－++傷寒桿菌－+－痢疾桿菌

鐵質(zhì)雙糖瓊脂基上各種腸道桿菌的生長(zhǎng)情況

第24頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四腸道桿菌在KI培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性第25頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四Indol實(shí)驗(yàn)生化反應(yīng)2——Indol實(shí)驗(yàn)第26頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四2.腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象示教

大腸桿菌傷寒桿菌SS平板紅色大菌落無(wú)色透明小菌落

基礎(chǔ)培養(yǎng)基，乳糖(底物)，膽鹽、煌綠(抑制非致病菌)，中性紅（指示劑）。SS培養(yǎng)基：第27頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四3.五類(lèi)腸道桿菌的生化反應(yīng)及動(dòng)力示教大腸桿菌⊕⊕--+++/⊕變形桿菌⊕-+++/-+-/⊕乙型副傷寒桿菌⊕-++--+-/⊕傷寒桿菌

+-+/---+-/+痢疾桿菌

+---+/---/+葡萄糖乳糖H2S尿素靛基質(zhì)動(dòng)力雙糖鐵第28頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四4.腸道桿菌未知菌1和未知菌2的鑒定（操作，2人/組）未知菌雙糖鐵培養(yǎng)基(乳糖/固體/上，葡萄糖/半固體/下)生化反應(yīng)葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵尿素酶試驗(yàn)H2S試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)（蛋白胨水液體培養(yǎng)基）動(dòng)力試驗(yàn)（半固體培養(yǎng)基）（微量發(fā)酵管）

方法：血清學(xué)鑒定（玻片凝集反應(yīng)）（37℃×18~24h）第29頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四傷寒診斷血清傷寒診斷血清

++

未知菌1未知菌2血清學(xué)鑒定（玻片凝集反應(yīng)）？？第30頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四

結(jié)果：

雙糖鐵葡乳尿H2S靛動(dòng)力血清學(xué)未知菌1未知菌2

結(jié)論：未知菌1：？未知菌2：？第31頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四第32頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期四

管號(hào)加入物12345血清（Ab）1：250血清0.25ml1:500血清0.25ml1:750血清0.25ml緩沖液0.25ml0.25ml溶血素“O”(Ag)0.25ml0.25ml0.25ml0.25ml2%兔RBC0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml結(jié)果——﹢﹢＿第33頁(yè)