1螺旋體(spirochetes)概念是一群細長而柔軟、螺旋狀、運動活潑的原核細胞型微生物。與細菌相似：有細胞壁、原始核質.以二分裂方式繁殖.抗生素等藥物敏感等.分類和命名根據大小、螺旋數目、規則程度及螺旋間距等分為8個屬：屬和代表菌所致疾病傳播方式/媒介疏螺旋體屬(Borrelia)(包柔體屬)伯氏疏螺旋體(B.burgdorferi)萊姆病硬蜱回歸熱疏螺旋體(B.recurrentis)流行性回歸熱體虱杜通疏螺旋體(B.duttonii)地方性回歸熱軟蜱奮森疏螺旋體(B.vincentii)多種口腔感染條件致病鉤端螺旋體屬(Leptospira)問號鉤端螺旋體(L.interrogans)鉤端螺旋體病接觸疫水密螺旋體屬(Treponema)蒼白密螺旋體蒼白亞種(subsp.pallidum)梅毒性傳播蒼白密螺旋體地方亞種(subsp.endemicum)地方性梅毒皮膚損傷蒼白密螺旋體極細亞種(subsp.pertenue)雅司病皮膚損傷品他密螺旋體(T.carateum)品他病粘摸損傷3

主要學習的致病性螺旋體：鉤端螺旋體屬(Leptospira)：鉤端螺旋體疏螺旋體屬(Borrelia)：回歸熱螺旋體伯氏疏螺旋體密螺旋體屬(Treponema)：梅毒螺旋體4疏螺旋體(屬)：有5～10個稀疏而不規則的螺旋，呈波狀。密螺旋體(屬)：8～14個細密而規則的螺旋，菌體硬直、兩端尖。鉤端螺旋體(屬)：螺旋細密、規則，一端或兩端彎曲呈鉤狀。伯氏螺旋體(G染色)回歸熱螺旋體(Giemsa染色)回歸熱螺旋體(瑞氏染色)6梅毒螺旋體(暗視野)梅毒螺旋體(鍍銀染色)7鉤體(暗視野)鉤體(電鏡投影)鉤體(鍍銀染色)8鉤端螺旋體(Leptospira)一、生物學性狀形態與結構螺旋細密、規則，形似細小珍珠排列的細鏈，一端或兩端彎曲呈鉤狀。該屬細菌很多，可分為兩個種問號狀鉤端螺旋體(對人和動物致病)；雙曲鉤端螺旋體(對人不致病)鉤體(電鏡投影)鉤體(暗視野)鉤體(暗視野)鉤體(鍍銀染色)11螺旋體的形態、運動特點與其結構有關。暗視野顯微鏡：運動活潑，呈翻轉、滾動狀，沿長軸旋轉或扭轉伸屈。12染色性G—，但著色較困難。Fontana鍍銀染色法(鉤端螺旋體和密螺旋體)→→呈棕黑(褐)色。13培養特性需氧或微需氧，營養要求高?？?Korthof)氏液體培養基：需加10%兔血清或牛血清。適宜生長溫度:28～30℃最適pH:7.2～7.6，＜pH6.5死亡，最高能耐pH8.414生長緩慢在液體培養基中:28℃,1～2周,呈半透明云霧狀生長.固體培養基：1～3周，形成透明、不規則、直徑＜2mm的扁平細小菌落。低瓊脂(0.8%～1.0%)培養基：3～10天形成針尖大小的半圓形菌落。15抗原結構屬特異性抗原(genus-specificproteinantigen,GP-Ag)鉤體特有：血清學診斷群特異性抗原：菌體脂質多糖復合物。25血清群，我國：19血清群型特異性抗原:表面抗原,蛋白多糖復合物。273血清型，我國：161血清型16抵抗力60℃,1min即死亡。4℃,14天仍生存良好。在濕土或水中可存活數月。0.5%來蘇、1：2000升汞、1%石炭酸10～30min可殺死。對青霉素敏感。17二、臨床意義：人畜共患病，自然疫源性疾病傳染源及儲存宿主帶菌動物(我國主要為豬和鼠)傳播途徑皮膚粘膜接觸傳播。也可通過胎盤垂直感染胎兒，導致流產；偶有經哺乳傳給嬰兒或吸血昆蟲傳播18致病物質⑴內毒素樣物質：毒性較細菌LPS低。⑵溶血素：破壞紅細胞，致小羊貧血、肝腫大、壞死、出血。⑶細胞毒性因子：注入小鼠腦內，1-2小時出現肌肉痙攣、呼吸困難、死亡。尿帶菌動物污染環境(水、土壤)皮膚或粘膜消化道淋巴系統入血鉤體血癥中毒癥狀：乏力、發熱、頭痛、肌痛、眼結膜充血、淋巴結腫大。腎、肝功能損害全身毛細血管內皮細胞損傷并伴有循環障礙。20所致疾病鉤端螺旋體病(人獸共患病)：發熱頭痛一身乏，眼紅腿痛淋巴大并發癥眼：虹膜睫狀體炎、脈絡膜炎腦：腦底多發性栓塞性動脈炎21三、微生物學檢查1.標本采集與處理培養：發病早期(1周內)：血液1周后：尿液和CSF血清學檢查：發病初期和發病第3～4周采集雙份血清測AbCSF(CerebralSpinalFluid):檢測抗體222.直接檢查：血液1ml＋2ml枸櫞酸鈉鹽水→→1000rpm,5～10min→→取上清,4000rpm,45～60min或10000rpm,30min→→取沉淀檢查.暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色直接免疫熒光染色免疫酶染色DAN雜交或PCR233.分離培養：最適溫度28℃1～2周觀察，可見靠近培養基液面呈半透明，云霧狀混濁血(1～2ml)腦脊液(0.5ml)導尿或中段尿離心取沉渣(加5-氟脲嘧啶，殺滅雜菌)疫水Korthof培養基28℃血清學鑒定(MAT)24鉤體(每視野可見50～60條活鉤體，約為2×108螺旋體/ml)已知Ab＋28～30℃、2h暗視野顯微鏡觀察蜘蛛樣凝集塊及菌體溶解鑒定254.抗體檢測：顯微鏡凝集試驗(microscopicagglutinationtest,MAT)標本發病初期和發病3～4周雙份血清,觀察抗體滴度的動態變化。CSF檢測抗體26抗原(標準菌株4～7天的培養物，每視野可見50～60條活鉤體，約為2×108螺旋體/ml)不同稀釋度的病人血清、CSF＋28～30℃、2h暗視野顯微鏡觀察蜘蛛樣凝集塊及菌體溶解方法：陰性對照陽性反應27結果判斷：以出現“2＋”的最高血清稀釋度為血清效價。一般血清效價達1:300以上有診斷意義。雙份血清：增高4倍或以上，可確診。28間接凝集試驗：膠乳凝集(測Ab)：(鉤體屬特異性抗原吸附于膠乳顆粒上，成為致敏顆粒Ag)Ag致敏顆粒病人血清＋凝集不凝集＋：有抗體－：無抗體TR/PatocⅠ特異性屬抗原玻片凝集試驗測IgM酶聯免疫吸附試驗(ELISA)：測抗體用于快速診斷ELISA法IgM-斑點-ELISA法2930適用于有雜菌污染的標本。常用幼齡豚鼠或金地鼠。動物試驗：31檢驗程序：標本(血、尿、CSF)直接檢出顯微鏡檢查DNA探針/PCR分離培養(柯氏培養基)血清學檢查動物接種觀察發病取心血培養鏡檢

鑒定：血清學32梅毒螺旋體(T.pallidum,TP)TP屬于密螺旋體(Treponema)，對人致病的密螺旋體有:蒼白密螺旋體又分為3個亞種：蒼白亞種：梅毒(性病)地方亞種：地方性梅毒極細亞種：雅司病(不是性病)品他密螺旋體：人類品他病33一、微生物學特性：形態、染色：8～14個細密而規則的螺旋，菌體硬直、兩端尖。Fontana鍍銀染色：呈棕黑(褐)色暗視野顯微鏡：運動活潑，呈翻轉、滾動狀，沿長軸旋轉或扭轉伸屈。34梅毒螺旋體(暗視野)梅毒螺旋體(鍍銀染色)35培養：活細胞中生長。在棉尾兔上皮細胞培養中能有限生長，繁殖慢，約30h才分裂一次，只能維持數代。3%～4%氧時生長最宜。36抗原結構：非特異性抗原：牛心肌的心脂質(cardiolipin)抗原與梅毒磷脂抗原屬異嗜性抗原，所以牛心類脂抗原與反應素可發生交叉反應。用于血清學診斷。特異性抗原：梅毒螺旋體的表面特異性抗原梅毒、雅司、地方性梅毒和品他病等密螺旋體的抗原性相同。37抵抗力：極弱對干燥、冷、熱很敏感，離體在外環境中干燥1～2h即死亡，50℃、5min死亡，血液中的梅毒螺旋體置4℃，3天死亡。對常用化學消毒劑敏感，1～2%石炭酸數分鐘死亡。對青霉素、四環素、紅霉素或砷劑均敏感。38二、臨床意義：致病物質：外膜蛋白：與細胞表面發生粘附作用。透明質酸酶：利于螺旋體擴散到血管周圍組織。自然情況下只感染人，人是唯一的傳染源。先天性梅毒：從母體通過胎盤傳染胎兒獲得性梅毒：性接觸傳播39獲得性梅毒，臨床上分三期：Ⅰ期梅毒：感染后3周，出現無痛性硬下疳。Ⅱ期梅毒(梅毒疹期)：全身皮膚、粘膜出現皮疹。血清中反應素100%(＋)。Ⅰ、Ⅱ期稱早期梅毒，傳染性強，但破壞性小。Ⅲ期梅毒：病變可波及全身組織和器官。404142先天性梅毒(胎傳梅毒)：經胎盤進入胎兒血流，并擴散至肝、脾、腎上腺等大量繁殖，引起胎兒全身感染，導致流產、早產或死胎；出生梅毒兒，呈現馬鞍鼻、鋸齒形牙、間質性角膜炎、先天性耳聾等特殊體征。43三、微生物學檢查：標本采集；下疳分泌物、皮疹滲出液、穿刺液、組織塊等。血清、血漿。不能立即檢查，應保存與－70℃(用10%二甲亞砜或15%甘油保護)44檢驗方法：直接檢查：適用于Ⅰ和Ⅱ期梅毒暗視野顯微鏡：有動力的密螺旋體鍍銀染色：棕褐色直接熒光檢測法：發熒光的螺旋體分離培養：在無生命培養基上不生長PCR：45血清學試驗：主要用兩種類型抗原的試驗非密螺旋體抗原試驗：VDRL(VenerealDiseaseResarchLaboratory)試驗(以膽固醇為載體包被上心脂質抗原構成VDRL抗原)USR(unheatedserumreagintest)TRUST(toluidineredunheated-serumtest)RPR(rapidplasmaregaincirclecard)(以活性炭為載體吸附VDRL抗原)46密螺旋體抗原試驗：用密螺旋體抗原檢測病人血清中特異性抗體，用于梅毒確認。FTA-ABS(fluorescenttreponemaantibody-abaorption)·熒光密螺旋體抗體吸收試驗FTA-ABS-DS(FTA-ABSdoublestaining)·梅毒螺旋體熒光抗體雙染色試驗MHA-TP(microhemagglutinationassayforantibodiestoT.pallidum)抗梅毒螺旋體抗體的微量血凝實驗TPI(Treponemapallidumimmobilizingtest)梅毒螺旋體制動試驗47其他密螺旋體蒼白密螺旋體地方亞種：地方性梅毒(非性病性梅毒)人與人之間的傳播是通過污染的食具臨床表現與梅毒很相似蒼白密螺旋體極細亞種：雅司傳播方式主要通過與感染皮膚病損的直接接觸臨床表現類似梅毒48YawslesioninDominican,

WestIndies49品他密螺旋體：品他病傳播也是與病損皮膚的直接接觸所致。大多發生于經濟較落后地區的兒童可取皮膚標本在暗視野顯微鏡下觀察有無密螺旋體存在，梅毒血清學試驗檢測血清中有無相應抗體存在。由于與梅毒螺旋體在形態、抗原結構，甚至DNA同源性方面基本相同，無法將它們各個區別。50伯氏疏螺旋體(B.burgdorferi)分類：伯氏疏螺旋體(B.burgdorferi)：美國、歐洲伽氏疏螺旋體(B.garinii)：歐洲、日本埃氏疏螺旋體(B.afelii)：歐洲、日本一般以伯氏疏螺旋體作為萊姆病的病原體。51臨床意義：萊姆病的病原體，自然疫源性傳染病，致病機制不肯定。儲存宿主：主要是野生和馴養的哺乳動物，嚙齒類中的白足鼠，畜類中的鹿更為重要。主要傳播媒介：硬蜱。52Lymeborreliosis

3weekerythemamigrans(游走性紅斑)Lymeborreliosis

erythemamigransannular2monthsold53Lymeborreliosis

acrodermatitischronica54Nymph(infected)InfectsInfectsYear1EggsFieldMice(infected)Adult♀FALLWINTERSPRINGSUMMERNymphAdultAttachtodeerDeerLarvaOngroundLymediseaseFalloffmousefeedonmiceInfectedlarvaLymeBorreliosisBorreliaburgdorferiYear2Year3♀♂mate55臨床表現：早期為慢性移行性紅斑、尚可有乏力、頭痛、發熱、肌痛等。晚期主要表現為慢性關節炎、慢性神經系統或皮膚異常等。56生物學性狀：形態、結構長11～17um，寬0.18～0.25um，運動活潑(扭動、翻滾、抖動)G—，Giemsa：紫紅色，Wright：棕紅色抗原性外膜蛋白A、B(OspA,Ospb)→→抗體(特異性高)但是有些分離株缺乏這2種蛋白，故對診斷意義有限。57培養BSK復合液體培養基，33～35℃，一般需2～3周，