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實驗十一病毒的血清學實驗第1頁/共12頁實驗十一病毒的血清學實驗操作：血凝實驗血凝抑制實驗第2頁/共12頁實驗目的血凝試驗：滴定病毒的血凝效價，采用一定的病毒量，通常采用4個血凝單位。血凝抑制試驗：應用標準病毒液測定血清中的相應抗體或應用特異性抗體鑒定新分離的血凝性病毒。第3頁/共12頁0.2棄掉孔號12345678910生理鹽水（ml）尿囊液（ml）0.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2病毒稀釋度1∶101∶201∶401∶801∶1601∶3201∶6401∶12801∶2560對照補充液（ml）各0.2ml雞紅血球細胞懸液（ml）各0.4ml血凝試驗（血凝效價的滴定)將有機玻璃板孔從1~10進行編號，從第1孔起至第10孔，每孔加生理鹽水0.2ml。將尿囊液按下表進行稀釋。自第10孔開始反方向向前每孔補充0.2ml生理鹽水。(WHY?)自第10孔開始反方向向前每孔加入0.5%雞紅血球0.4ml，搖勻后放置室溫45分鐘第4頁/共12頁0.2棄掉孔號1234567血清對照病毒對照紅細胞對照生理鹽水（ml）抗血清（ml）0.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.20.4抗血清稀釋度1∶101∶201∶401∶801∶1601∶3201∶6404個單位病毒液（ml）各0.2ml0.2ml雞紅血球細胞懸液（ml）各0.4ml血凝抑制試驗從第1孔起至第9孔，每孔加生理鹽水0.2ml，第10孔加0.4ml。抗血清按下表進行稀釋，第8孔為血清對照。于第1孔至第7孔中各加入0.2ml4個血凝單位的病毒液，第9孔亦加入0.2ml病毒液作病毒對照。稍加震搖后，每孔加入0.5%雞紅細胞0.4ml，室溫靜置45分鐘。第5頁/共12頁血凝試驗原理血凝素（hemagglutininHA）：由病毒基因編碼的糖蛋白刺突。與病毒吸附和傳入宿主細胞有關。HA能與人或其它動物多種紅細胞表面N－乙酰神經氨酸酶受體結合引起紅細胞凝集。第6頁/共12頁第7頁/共12頁血凝試驗結果判定效價判定：凝集特別顯著：“＋＋＋＋”凝集現象次之：“＋＋＋”凝集清楚可見：“＋＋”稍顯凝集者：“＋”血凝效價：呈“＋＋”凝集時的最高稀釋度。此時的稀釋度即為1個血凝單位。第8頁/共12頁血凝抑制試驗原理病毒引起的血凝現象能被相應的抗血凝素抗體所抑制，稱血凝抑制。利用血凝素特異性抗體與病毒表面相應的HA相互作用，使病毒血凝現象抑制的試驗稱血凝抑制試驗。第9頁/共12頁血凝原理血凝抑制原理第10頁/共12頁血凝抑制試驗結果判定測定孔RBC沉于孔底中心，呈紐扣狀。(+)

凝集（-）血清對照孔：RBC沉于孔底，無自凝病毒對照孔：凝集RBC對照孔：無自凝血凝抑制試驗效價：呈完全血凝抑制使的最高血清稀

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