關于病毒與細胞的相互作用第1頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第四章病毒與細胞間的相互作用第一節病毒的細胞培養第二節病毒與細胞的相互作用第2頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第一節病毒的細胞培養病毒是嚴格的細胞內寄生微生物，培養病毒必須使用細胞。根據病毒的不同選用敏感動物（動物接種）、雞胚（雞胚接種）或離體細胞進行分離培養（細胞培養）。第3頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五一、動物接種接種后通常以動物發病、死亡作為感染的指標。按病毒侵襲部位不同選擇適當的接種途徑。嗜神經病毒接種在小鼠的腦內。痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔角膜。第4頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五動物接種的優缺點：優點：（1）不需要復雜的儀器設備；（2）技術簡單；（3）易成功缺點：（1）個體差異大（2）價格昂貴（3）數量有限（4）需要隔離畜舍第5頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五二、雞胚接種一種比較經濟簡便的方法。卵殼殼膜第6頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五接種途徑

絨毛尿囊膜接種9-13日齡

尿囊腔接種9-10日齡卵黃囊接種6-8日齡羊膜腔接種10日齡腦內接種10日齡第7頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五

1氣室2卵殼3卵黃囊4卵白5尿囊腔

6絨毛尿囊7胚胎8羊水腔9胚胎外腔第8頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第9頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第10頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五雞胚接種的優缺點：優點：技術簡單、來源充沛、價格低廉、數量可大，不需特殊設備

缺點：很多病毒不能適應，主要是哺乳動物的病毒。第11頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五

細胞培養(cellculture)是指利用機械、酶或化學方法使動物組織或傳代細胞分散成單個乃至2～4個細胞團懸液進行培養。

三、細胞培養第12頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五每個細胞生理特性基本一致，對病毒易感性相等無個體差異，準確性和重復性好可嚴格執行無菌操作細胞培養本身就能顯示病毒的生長特征應用空斑技術可進行病毒的克隆化優點：第13頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五根據細胞來源、染色體特征及傳代次數，可分為三種類型：原代細胞：動物組織經胰蛋白酶消化處理，使細胞分散而得到的細胞。二倍體細胞：將長成單層的原代細胞消化分散成單個細胞，繼續培養傳代，其染色體數與原代細胞一樣，保持其二倍染色體數目的細胞，稱為二倍體細胞。傳代細胞：能在體外持續增殖傳代的細胞，大多數由癌細胞或二倍體細胞突變而成。（一）細胞的類型第14頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五（二）細胞培養的方法靜置培養：實驗室常用。細胞懸液裝瓶，5%CO2溫箱靜置培養，細胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最后長成單層。旋轉培養：大規模生產疫苗。細胞在玻瓶內生長時，玻瓶不斷緩慢旋轉，細胞貼附于玻瓶四周，長成單層。懸浮培養微載體培養：懸浮、微載體第15頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第二節病毒與細胞的相互作用殺細胞感染非殺細胞感染

引致持續感染，對細胞代謝無影響。RNA干擾產生干擾素

第16頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五生產性感染（productive）：病毒感染后能產生完整的子代病毒顆粒。宿主細胞感染病毒發生的變化可能是細胞死亡或細胞轉化。非生產性感染（nonproductive）或稱頓挫感染（abortiveinfection）:病毒感染后不形成完整的病毒顆粒。持續性感染（persistentinfection）:持續長時間的感染，感染過程中不形成感染性的病毒顆粒。第17頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第18頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五病毒在宿主易感細胞內增殖造成細胞損傷與死亡，這種感染稱為殺細胞性變化。

一、病毒引致的殺細胞變化殺細胞變化第19頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五由病毒感染導致的細胞損傷。CPE能在光學顯微鏡下觀察。①細胞圓縮，如痘病毒和呼腸孤病毒等；②細胞聚合，如腺病毒；③細胞融合形成合胞體，如副粘病毒和皰疹病毒；④有些病毒能形成包涵體。（一）細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)第20頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五CPE觀察第21頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五CPE觀察第22頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五CPE觀察第23頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五正常細胞CPECPE觀察第24頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五正常單層A72細胞接種CCV后出現細胞拉網的的單層A72細胞CPE觀察第25頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五CPE觀察正常單層A72細胞接種犬冠狀病毒（CCV）后形成合胞體的的單層A72細胞第26頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五合胞體（syncytia）是病毒感染后導致感染細胞及相鄰細胞細胞膜融合的產物，表現為若干細胞的相鄰細胞膜消失，成為多核巨細胞。可以使病毒從感染的細胞直接進入相鄰的正常細胞，有利于病毒在細胞間的擴散。第27頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五病毒引致的細胞凋亡和壞死細胞死亡（celldeath）:病毒的繁殖、產物等直接引起細胞的死亡。細胞凋亡（cellapoptosis）是病毒感染引起細胞的生理性死亡，即程序性死亡。由于病毒的殺細胞感染導致的死亡，總是發生在病毒復制完成之后。病毒抗凋亡，以延長細胞生命，直至完成子代病毒的復制周期。細胞總是在子代病毒產出之前自行死亡；是宿主細胞的重要防御機制。可及早清除感染病毒的細胞，延緩病毒在體內蔓延。第28頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第29頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五病毒感染抗體依賴的增強作用（antibody-dependentenhancementofviralinfection,ADEsyncytia）:在病毒感染過程中，宿主產生的抗體與病毒結合，非但未能阻斷病毒吸附宿主細胞，反而增強了病毒對細胞的感染，提高了病毒的滴度。第30頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五能夠使半數組織細胞在一定條件下發生細胞病變的病毒量。用于判定病毒的毒力。50%組織細胞感染量（TCID50）第31頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五（二）空斑試驗

plaqueassay細胞單層接種病毒后再覆蓋一層含營養液的瓊脂層。這樣病毒自然感染釋放后不能懸浮于液體中，只能感染鄰近與之接觸的細胞，以致感染區由原始病灶向四周擴大，形成類似細菌的菌落，此即空斑試驗。第32頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第33頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第34頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第35頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第36頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五空斑是由一個感染性病毒粒子復制形成的，類似于細菌的菌落，稱為空斑形成單位（PFU）。病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU來表示。

CELLS第37頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第38頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五空斑試驗的用途：1.測定病毒數量2.純化病毒

單個空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，可獲得病毒克隆。3.鑒定病毒

不同病毒的空斑具有不同的特征。第39頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五（三）包涵體（inclusionbody)定義：是某些病毒感染細胞產生的特征性的形態變化，在普通光學顯微鏡下可見胞漿或胞核內出現的呈嗜酸性或嗜堿性染色、大小數量不等的圓形或不規則形的團塊狀結構，稱為包涵體，又稱為內基氏小體（Negribody）。第40頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五包涵體的性質病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的Negri氏體大量晶格樣排列的病毒顆粒組成，如腺病毒的包涵體細胞變性的產物，不含病毒，如皰疹病毒的包涵體第41頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五狂犬病毒包涵體（Negribody）第42頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五定義：細胞利用內源或外源的小分子雙股RNA片段，特異性地降解同源基因的mRNA，從而導致靶基因轉錄后基因沉默（posttranslationalgenesilence,PTGS）的現象。

二、RNA干擾（RNAinterference,RNAi）第43頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五定義：由病毒或誘生劑刺激機體細胞產生的具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節作用的糖蛋白。

種類：