1、肺炎支原體明膠顆粒凝集試驗及其臨床應用肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，Mp）是引起非典型性肺炎的常見病原體。支原體肺炎的發病率可占到所有肺炎病例的2030%Mp主要的易感對象為兒童和年輕人，但近年來發現65歲以上老年人群發生的社區獲得性肺炎中有15%是Mp引起的，且5歲以下的嬰幼兒也可發生感染Mp感染可發生在一年中的任何季節，沒有明顯的季節流行特征。支原體肺炎同時具有地方性和周期流行性的特點，流行周期一般為37年，在流行的高峰時，其發病率可達到肺炎總發病率的7080%Mp感染臨床上主要表現為氣管炎和上呼吸道感染癥狀。約15%的感染者沒有臨床癥狀，只有510%會發展成為肺

2、炎。其主要特點是起病較慢，有頭疼、發熱、咽喉疼痛、不適以及最典型的干咳等癥狀。一般情況下，支原體肺炎的死亡率不高，但少見的肺外感染（累及神經、心臟、關節、紅細胞等）卻往往表現出更嚴重的癥狀肺炎支原體概況 可引起非典型肺炎的病原體很多，單憑臨床癥狀和影象學檢查不能明確區分Mp和其它病原體所引起的感染，因此實驗室檢測結果就顯得尤為重要：一般實驗檢查 白細胞計數(25%升高)；血沉(30%升高)；痰液檢查(無革蘭陰性菌)；肝腎功能(可能出現一些非特異性的異常)培養 根據臨床上的情況，咽拭子、痰液、胸水、肺活檢組織等均可用于培養。應注意床邊接種及使用運送培養基（SP4肉湯）。培養需要營養要求很高的專用

3、選擇性培養基，耗時長(35周)且敏感性一般血清學試驗 是目前實驗室檢測的主要方法抗原檢測 使用抗原捕獲酶免疫測定, 據稱可達到較高的敏感性和特異性。但該方法有被分子生物學方法取代的趨勢分子生物學檢測 近年來各種分子雜交和PCR檢測方法在科研中的應用越來越多，今后有可能成為Mp實驗室診斷的常規方法之一肺炎支原體的實驗室檢測人類對Mp無先天免疫性，尚無可實際應用的有效疫苗，感染后也不能產生完全的保護性免疫Mp特異性的IgM抗體在發病后不久即可出現升高，14周內達到峰值，然后在幾個月內逐漸下降到沒有臨床意義的水平。急性感染后IgM的持續時間在不同個體中差異較大。兒童的IgM反應一般強于成人，約50%

4、的成人患者無法在Mp感染后測到IgM的升高IgG的出現時間晚于IgM，5周左右達到峰值，上升速度較慢且在體內的持續時間較長（4年左右），但在感染數月后就會下降到較低水平。有些兒童無法測得明顯的IgG反應特異性IgA的免疫反應與IgM類似，但其在成年人尤其是老年人中的反應水平更高肺炎支原體的免疫性冷凝集試驗：冷凝集素是對Mp最早的體液反應，50%的病人在Mp感染第2周時的滴度可達到1:32以上，而6周內即降至感染前的水平。冷凝集試驗雖然簡便、快速，但它不是針對Mp的特異性試驗，多種其他微生物感染（如EB病毒、巨細胞病毒、肺炎克雷伯菌）和自身免疫性疾病時冷凝集素滴度均可升高。同時，該試驗的敏感性也

5、只有5060%，對于12歲以下的兒童其敏感性則更差補體結合試驗(CFT)：十幾年前，CFT仍是Mp血清學試驗的標準方法，但越來越多的研究表明該方法的敏感性和特異性都不夠高。CFT所用的抗原為Mp的氯仿-甲醇糖脂抽提物，它可與人類、細菌及植物的某些抗原表位發生交叉反應（如腦膜炎時，CFT滴度可明顯升高）。CFT測定的主要是IgM，對IgG不很敏感，導致其整體敏感性偏低。 肺炎支原體的血清學試驗（一）間接血凝試驗(PHA)：將提純的Mp抗原連接到紅細胞（禽類或羊）上，與血清中的抗Mp抗體可發生凝集反應。該試驗的敏感性和特異性均明顯優于CFT。PHA不能區分抗體的類型，因此單份測定出現低滴度的抗體陽

6、性結果并不能確定是既往感染還是新近感染。最好能間隔23周再采取第2份血樣進行測定，觀察抗體滴度是否有4倍以上的增加（血清轉化）。單次測定出現高滴度抗體陽性（大于1:8）也有助于對Mp新近感染的判斷明膠顆粒凝集試驗(PA)：其原理與間接血凝試驗基本相同，只是用人工合成的明膠顆粒取代了紅細胞作為凝集試驗的載體，從而使結果判定更清晰，靜置穩定性更好，非特異性反應大大減少，檢測的敏感性也有了進一步提高（對IgM和IgA更敏感）肺炎支原體的血清學試驗（二）酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：是目前Mp血清學試驗中常用的方法，可分開檢測IgM、IgG和IgA，敏感性和特異性均能達到較高的水平。雖然單次測定Ig

7、M （或IgA）陽性即可基本判定為Mp的新近感染，但陰性時卻無法排除感染的可能性。IgG一般須進行間隔2周以上的雙份血清測定，有4倍以上滴度上升時才能做出Mp新近感染的診斷。因此，在ELISA測定中應強調同時檢測IgG和IgM （或IgA），且最好能對間隔2周以上的雙份配對血清進行抗體轉化情況的測定，從而做出明確的診斷金標快速檢測：具有簡便、快速的優點。但也同樣應強調IgG和IgM的同時檢測。由于只能進行定性測定，無法觀察血清轉化情況，限制了其在臨床診斷中的價值其它方法：間接免疫熒光試驗（IFA）、乳膠凝集試驗（LA）、免疫印跡測定（WB）、黏附抑制試驗、放射免疫沉淀試驗、補體介導的殺傷試驗等

8、肺炎支原體的血清學試驗（三）對肺炎支原體的治療原則對僅有上呼吸道癥狀的肺炎支原體感染，不需要進行抗生素治療支原體肺炎雖然有一定的自限性，但仍應進行抗生素治療以縮短病程并減少其傳染性在非典型性肺炎的病原體未完全確定時，可以采取一些經驗用藥，對Mp有效的藥物也能覆蓋一些其他病原體（非病毒類）抗生素的使用：首選為大環內酯類，也可選用四環素類（老年人）和喹諾酮類。Mp對-內酰胺類抗生素天然耐藥，磺胺類對Mp也沒有作用抗生素使用一般應持續710天，但口服用藥延長至1421天也是合適的除使用抗生素外，還應采取一些對癥治療措施（止咳藥、退燒藥、止痛劑等）賽樂迪亞（Serodia）MYCOII 肺炎支原體抗體

9、明膠顆粒凝集試驗凝集試驗與ELISA的原理比較（一）ELISA Color凝集試驗凝集試驗與ELISA的原理比較（二）ELISA凝集試驗凝集試驗與ELISA操作步驟的比較ELISA凝集試驗加入樣品和稀釋液第一步反應洗滌洗滌第二步：酶反應顯色第三步：加入底物結果判讀孵 育凝集圖像反應溫度對凝集試驗及ELISA的影響凝集試驗 10 20 30反應溫度（）反應ELISA 不同類型樣品對凝集試驗及ELISA檢測結果的影響 X：假陽性 O加熱滅活 X：與底物有關O溶血O黃疸O脂血 OO血漿 O O血清 ELISA 凝集試驗樣品類型O：無影響：部分有影響X：有影響明膠顆粒的制備明 膠阿拉伯膠醋 酸染料/色

10、素偏 磷 酸乙 醇水 3.0m表面電荷-0.760 -0.830 明膠顆粒（電鏡照片） 明膠顆粒的致敏 5%明膠顆粒/0.15M PBS（pH7.2）5ppm 丹寧酸/0.15M PBS（pH7.2）孵育（37，15min）生理鹽水洗滌（2000rpm，5min）活化的明膠顆粒/0.15M PBS（pH59）抗原孵育（37，60min）生理鹽水洗滌（2000rpm，5min）5%致敏明膠顆粒/懸浮液*冷凍干燥* 0.15M PBS（加入正常兔血清、明膠、阿拉伯膠等）SERODIA- MYCOII操作步驟SERODIA- MYCOII的結果判讀最終稀釋倍數非特異性反應滴度408016032064

11、01280256051201024020480對照肺炎支原體（Mac株）+640人形支原體（PG21株） 40唾液支原體 40口腔支原體 40口腔支原體II型 40發酵支原體 40咽支原體 40SERODIA- MYCOII的特異性正常人肺炎支原體抗體滴度的分布Myco II測定的抗體滴度達到1:40 ：抗Mp抗體陽性Myco II測定的抗體滴度達到1:160 ：提示新近感染以p180免疫印跡法作為參考方法，用56份血清樣品對5種Mp抗體商品化試驗進行評估p180/其它方法血清份數CFTIFAELISAPALA333333333321201922210000023412總體一致率 96.4%9

12、4.6%92.8%98.2%96.4%敏感性 100%100%100%100%100%特異性 91.3%87.0%82.6%95.6%91.3%CFT：補體結合試驗； IFA：間接免疫熒光試驗；ELISA：酶聯免疫吸附試驗； PA：明膠顆粒凝集試驗； LA：乳膠凝集試驗SERODIA- MYCOII與其它方法比較（一）p180免疫印跡圖象出現顯著變化的6對血清樣品的血清檢測結果患者號(性別/年齡)日期月/日p180印跡CFTIFAELISAPALAO.D.值比率1 (男/3歲)1/081/250+832641280.010.27274012802 (男/4歲)10/1612/170+83264

13、5120.210.412405120+3 (男/4歲)1/162/170+2560.340.872.53202560+4 (男/19歲)10/1611/030+10240.310.31140204805 (男/12歲)3/193/31+8646410240.390.942.440204806 (女/26歲)1/061/19+864642560.270.481.86401280+CFT：補體結合試驗； IFA：間接免疫熒光試驗；ELISA：酶聯免疫吸附試驗； PA：明膠顆粒凝集試驗； LA：乳膠凝集試驗SERODIA- MYCOII與其它方法比較（二）某市2003年就診患者Mp抗體檢測陽性率月份分布全年平均陽性率為：40.1%（5254/13094）SERODIA- MYCOII臨床應用（一）診斷標準大于等于 1:160小于1:160 總計 檢測陽性數 112 171 283 出院確診數 101 132 233 診斷符合率 90.18% 77.19% 82.3%2004年1-3月某醫院病房送檢Mp結果與臨床診斷符合率說明：在283例 M p陽性病例中，有50例的出院第一診斷為非Mp感染疾病，不排除同時有MP感染的可能。SERODIA- MYCOII臨床應用（二）SERODIA- MYCOII臨床應用結論SERODIA- MYCOII凝集試驗定量檢測的是肺炎支原體特異性抗體含量，包括