1、農殘檢測常用方法技術要點農殘檢測常用方法技術要點卞紅正卞紅正安徽省農產品質量安全檢測中心安徽省農產品質量安全檢測中心農業部農產品質量安全監督檢驗測試中心（合肥）農業部農產品質量安全監督檢驗測試中心（合肥）農產品質量安全檢測技術系列之農產品質量安全檢測技術系列之主要內容速測方法3準確定性定量檢測法4當前常用檢測方法2前言1以前農殘檢測方法的頒布：國家標準化管理委員會頒布國家標準國家標準化管理委員會頒布國家標準（GBGB）; ;農業部頒布行業標準農業部頒布行業標準（NYNY）; ;國家進出口商品檢驗檢疫總局頒布行業標準，編號國家進出口商品檢驗檢疫總局頒布行業標準，編號為為SNSN。已頒布標準截至截

2、至目前，已頒布的農產品和食品農藥殘留檢測方法目前，已頒布的農產品和食品農藥殘留檢測方法標準共有標準共有39390 0多多個個。其中其中：國家標準國家標準9292個個，農業行業標農業行業標準準3535個個，商檢行業商檢行業標準約標準約270270個。個。前 言 根據根據20092009年年6 6月月1 1日實施的中華人民共和國食品安日實施的中華人民共和國食品安全法第二十一條和第二十二條的規定，今后凡涉全法第二十一條和第二十二條的規定，今后凡涉及食品安全的標準（八個方面），統一由及食品安全的標準（八個方面），統一由國務院國務院衛衛生行政部門部制定和頒布生行政部門部制定和頒布，國務院標準化行政部門，

3、國務院標準化行政部門提供國家標準編號提供國家標準編號 。 對現行的食用農產品質量安全標準、食品衛生標準、對現行的食用農產品質量安全標準、食品衛生標準、食品質量標準和有關食品的行業標準中強制執行的食品質量標準和有關食品的行業標準中強制執行的標準予以整合，統一公布為食品安全國家標準。標準予以整合，統一公布為食品安全國家標準。 農殘檢測方法標準全部統一為農殘檢測方法標準全部統一為食品安全食品安全國家標準。國家標準。前 言一、當前常用檢測方法一、當前常用檢測方法二、速測方法1快速檢測程序試樣試樣檢測檢測 陰性陰性陽性陽性復測（兩次以上）復測（兩次以上）陰性陰性陽性陽性根據市場根據市場規定處理規定處理

4、準確定量準確定量定性定性分析分析二、速測方法GB/T 5009.199-2003NY/T 448-2001適用適用范圍范圍 蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質，易導致假陽性；菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質，易導致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣） 適用葉菜適用葉菜(除韭菜除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除除蘿卜、茭白等蘿卜、茭白等)方法方法速測卡法速測卡法(紙片法紙片法)和酶抑制率法和酶抑制率法(分光光度法分光光度法)酶抑制率法酶抑

5、制率法(分光光度法分光光度法)波長波長412nm4103nm酶酶乙酰膽堿酯酶（用乙酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）（3min吸光度變化值吸光度變化值0.3，4冰箱保存不超過冰箱保存不超過4天）天）丁酰膽堿酯酶（用丁酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）3min吸光度變化值吸光度變化值0.40.8之間之間底物底物硫代乙酰膽堿硫代乙酰膽堿（蒸餾水溶解，（蒸餾水溶解，4冰箱保存不超過冰箱保存不超過2周）周）碘化硫代丁酰膽堿（碘化硫代丁酰膽堿（BTCI）（用（用pH8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）顯色劑顯色劑二硫代二硝基苯甲酸（二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氫

6、鈉碳酸氫鈉緩沖液溶液，緩沖液溶液，4冰箱保存冰箱保存二硫代二硝基苯甲酸（二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）緩沖液溶解緩沖液溶解步驟步驟取表面干凈的蔬菜或瓜果，葉菜類取葉片部分，瓜取表面干凈的蔬菜或瓜果，葉菜類取葉片部分，瓜果取表皮帶肉，剪成果取表皮帶肉，剪成1cm左右見方碎片。左右見方碎片。取樣取樣1g置于小燒杯內，加入置于小燒杯內，加入5mL緩沖溶液，振蕩緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出并靜置，倒出并靜置3-5分鐘；分鐘；于小試管內分別加入于小試管內分別加入2.5mL樣本提取液、樣本提取液、100uL酶液、酶液、100uL顯色劑，搖勻后于顯色劑，搖勻后于37放置放置15min以上，加入以上，加入

7、100uL底物，應立即倒入儀器比色皿中，記錄底物，應立即倒入儀器比色皿中，記錄3min吸光吸光度變化值。度變化值。取取2g切碎的樣本（非葉菜類取切碎的樣本（非葉菜類取4g）放入提取瓶內，）放入提取瓶內，加入加入20mL緩沖液，振蕩緩沖液，振蕩1-2min，倒出并靜置，倒出并靜置3-5分鐘；分鐘；于小試管內分別加入于小試管內分別加入50uL酶液、酶液、3mL樣本提取液、樣本提取液、50uL顯色劑，于顯色劑，于37-38下放置下放置30min后分別加入后分別加入50uL底物，倒入比色皿中，用儀器測定。底物，倒入比色皿中，用儀器測定。結果結果抑制率抑制率50%：陽性：陽性（陽性樣品需要重復檢測（陽性

8、樣品需要重復檢測2次以上，若次以上，若不合格不合格, 用用色譜、色譜、質譜等質譜等進一步定性定量分析進一步定性定量分析）抑制率抑制率70%：陽性：陽性（陽性樣品應有（陽性樣品應有2次以上的重復檢測，若次以上的重復檢測，若不合格不合格, 用用色譜、色譜、質譜等質譜等進一步定性定量分析進一步定性定量分析）備注備注1、當溫度低于、當溫度低于37時，酶反應速度放慢，加入酶液和顯時，酶反應速度放慢，加入酶液和顯色劑后反應時間應該延長，延長時間的確定，應以空白色劑后反應時間應該延長，延長時間的確定，應以空白對照測試對照測試3min吸光度變化值吸光度變化值0.3方可進行下一步操作。方可進行下一步操作。2、3

9、min吸光度變化值吸光度變化值0.3原因：酶的活性不夠；原因：酶的活性不夠；酶的活性太低。酶的活性太低。3、樣品檢測放置時間與空白的時間應該一致。、樣品檢測放置時間與空白的時間應該一致。1、樣品檢測放置時間與空白的時間應該一致。、樣品檢測放置時間與空白的時間應該一致。2、丁酰膽堿酯酶對樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、二嗪、丁酰膽堿酯酶對樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、二嗪磷等農藥不太靈敏，檢出濃度均在磷等農藥不太靈敏，檢出濃度均在10mg/kg以上。以上。二、速測方法2結果計算抑制率（抑制率（% %）= = 抑制率：酶被抑制的程度抑制率：酶被抑制的程度A Ac c 對照組對照組3min 3min 后與后與

10、3min 3min 前吸光值之差前吸光值之差; ; A A 樣本樣本3min 3min 后與后與3min 3min 前吸光值之差。前吸光值之差。100cscAAA二、速測方法3注意事項 20112011年首屆全省農產品質量安全檢測技術人員大比武現場操作年首屆全省農產品質量安全檢測技術人員大比武現場操作評分評分細則（農殘速測類）細則（農殘速測類） (2011(2011年年) )中對中對取樣部位、處理方法取樣部位、處理方法等等內容進行內容進行詳細的分項打分，這些打分項都是平時檢測中需要注意的地方。詳細的分項打分，這些打分項都是平時檢測中需要注意的地方。 適用范圍：蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜

11、、茭白、蘑菇和適用范圍：蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質，易導致假陽性；葉綠素高的也會番茄含有抑制酶的植物次生物質，易導致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）干擾，這兩類可整株取樣） ；農藥：有機磷和氨基甲酸酯類。；農藥：有機磷和氨基甲酸酯類。 所有操作步驟順序、加液量、處理時間一定要嚴格按標準執行。所有操作步驟順序、加液量、處理時間一定要嚴格按標準執行。 建議使用同一批比色皿，不同批次的比色皿對結果可能存在影響。建議使用同一批比色皿，不同批次的比色皿對結果可能存在影響。一批上機樣品同時檢測，共用一個對照。一批上機樣品同時檢測，共用一個對照

12、。 檢測前一定要檢查酶液活性（檢測前一定要檢查酶液活性（3min3min吸光度變化值吸光度變化值0.30.3）；酶液反復）；酶液反復解凍最多不超過兩次解凍最多不超過兩次, ,否則會影響酶活性。否則會影響酶活性。二、速測方法4如何看待農殘快速測定方法n 何為快速檢測方法？ 指檢測速度相對較快、便于現場篩查的檢測方法。其主要適合于定性和半定量測定，檢測準確度相對要差一些。n 法律地位 中華人民共和國農產品質量安全法第三十六條規定“采用國務院農業行政主管部門會同有關部門認定的快速檢測方法進行農產品質量安全監督抽查檢測，被抽查人對檢測結果有異議的，可以自收到檢測結果時起四小時內申請復檢。復檢不得采用快

13、速檢測方法。” 二、速測方法5農殘速測與色譜、質譜等方法的結果比較n 時間：從時間：從20052005年至年至20072007年。年。n 項目：農業部開展的省份間農產品質量安全例行監測互查。項目：農業部開展的省份間農產品質量安全例行監測互查。n 要求：承擔任務的要求：承擔任務的3737個部級中心分別用農殘速測進行初步篩查，并把所有樣個部級中心分別用農殘速測進行初步篩查，并把所有樣品用品用NY/T 761NY/T 761等方法進行色譜、質譜定量檢測。等方法進行色譜、質譜定量檢測。n 目的：想驗證速測與色譜檢測的相關性，如果有相關性，就可以先用速測初目的：想驗證速測與色譜檢測的相關性，如果有相關性

14、，就可以先用速測初步篩查，然后把陽性（超標的）樣品再用色譜等方法準確定量，那樣可以大大步篩查，然后把陽性（超標的）樣品再用色譜等方法準確定量，那樣可以大大減少工作量。減少工作量。n 結論：速測結果和色譜等定量檢測結果幾乎沒有任何相關性。說白了就是速結論：速測結果和色譜等定量檢測結果幾乎沒有任何相關性。說白了就是速測超標的，色譜檢測不出來，速測不超標的，色譜可能會超標。因為沒有什么測超標的，色譜檢測不出來，速測不超標的，色譜可能會超標。因為沒有什么相關性，農業部在省部級檢測中心這個層級最終導致放棄速測方法。相關性，農業部在省部級檢測中心這個層級最終導致放棄速測方法。所以，速測僅僅是法律認可的一項

15、工作，不要較真，如被檢方有異議，更所以，速測僅僅是法律認可的一項工作，不要較真，如被檢方有異議，更不能拿速測陽性結果進行處罰和仲裁。不能拿速測陽性結果進行處罰和仲裁。二、速測方法6為什么采用農殘快速檢測法 （非官方解釋最實在的理解） 鮮活農產品不宜長時間保存，快速檢測方法克服了當前所有準確定量方法（色譜、質譜方法等）檢測周期過長的問題。【時限性考慮時限性考慮】 我國研究院所和各地市針對特殊樣品，采用酶抑制法取得了與準確定量方法（色譜、質譜方法等）一致性結果。【所謂的科學依據所謂的科學依據】 快速檢測方法是經過農業部會同有關部門認定發布的，經法律認可的方法，具有權威性和統一性（不過可靠性談不上不

16、過可靠性談不上）。【法律依據法律依據】 快速檢測方法所需設備簡單，易掌握，平時運營成本相對較低，選用該法主要是從我國從業人員素質、經濟狀況的國情出發來考慮的（不可能要求大家都去買質譜、色譜等設備）。【方法經濟性、操控性方法經濟性、操控性】 明知快速檢測方法準確度不高，選用該法，主要是在縣級、鄉鎮等一級進行普及，讓經營戶、老百姓發現有人在抓農產品質量安全，更主要的是起到震懾作用。【震懾作用震懾作用】【案例】河南省鄭州市農殘快速檢測網絡【案例】河南省鄭州市農殘快速檢測網絡三、準確定性定量檢測法1基本步驟：u檢測前工作準備檢測前工作準備u提取提取u凈化凈化、濃縮定容、濃縮定容u標準溶液配制和測定標準

17、溶液配制和測定u結果計算結果計算三、準確定性定量檢測法2提取條件的優化：uQuEChERSQuEChERS方法選擇方法選擇單一單一乙腈為提取溶劑乙腈為提取溶劑。u含水量低或含糖量高的樣品應加入一定量的水后再含水量低或含糖量高的樣品應加入一定量的水后再進行提取，以提高提取效率。進行提取，以提高提取效率。u乙腈對乙腈對N N- -三鹵甲硫基殺菌劑類農藥，具有降解作用，三鹵甲硫基殺菌劑類農藥，具有降解作用，如克菌丹、抑菌靈等；通過加入如克菌丹、抑菌靈等；通過加入1%1%的醋酸，調節的醋酸，調節pHpH值，值，能夠抑制上述農藥的分解。能夠抑制上述農藥的分解。三、準確定性定量檢測法3鹽析：u鹽析劑種類：

18、氯化鈉、醋酸鈉和硫酸銨等；鹽析劑種類：氯化鈉、醋酸鈉和硫酸銨等；u鹽析劑能與水結合使游離水分子減少，減少了農藥鹽析劑能與水結合使游離水分子減少，減少了農藥在水相中的溶解度；在水相中的溶解度；u鹽析劑能減少有機溶劑在水中的溶解度；鹽析劑能減少有機溶劑在水中的溶解度；u鹽析劑能使水相的比重增大，有助于分離。鹽析劑能使水相的比重增大，有助于分離。三、準確定性定量檢測法4脫水劑的選擇：u無水硫酸鎂吸水能力比無水硫酸鈉高無水硫酸鎂吸水能力比無水硫酸鈉高3 3倍倍。u無水硫酸鎂吸水的同時也放熱，促進農藥的萃取。無水硫酸鎂吸水的同時也放熱，促進農藥的萃取。無機鹽無機鹽加入量（加入量（g）乙腈中的水分乙腈中的

19、水分（加入前，（加入前，%）乙腈中的水分乙腈中的水分（加入后，（加入后，%）NaCl2g / 27mL276.0Na2SO40.8g / 4mL63.9MgSO40.8g / 4mL60.6三、準確定性定量檢測法5凈化劑的選擇：uPSAPSA提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基質干擾；主要提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基質干擾；主要用來消除各種有機酸、色素以及一些糖和脂肪酸。為了減少儀用來消除各種有機酸、色素以及一些糖和脂肪酸。為了減少儀器的維護，往往在器的維護，往往在PSAPSA的基礎上加的基礎上加C18C18凈化。凈化。uPSAPSA可去除可去除9090以上的脂肪酸和以上的脂肪酸和

20、5050左右的色素。左右的色素。uGCBGCB可去除可去除9090以上的色素，但對脂肪酸的凈化能力僅有以上的色素，但對脂肪酸的凈化能力僅有1010左右。對于一些含色素高的樣品，將兩者聯合使用。但用量要左右。對于一些含色素高的樣品，將兩者聯合使用。但用量要適當，否則會吸附一些平面結構的農藥，影響回收率，如六氯適當，否則會吸附一些平面結構的農藥，影響回收率，如六氯苯、百菌清等。苯、百菌清等。凈化劑凈化劑去雜種類去雜種類PSAPSA糖、有機酸、色素等糖、有機酸、色素等C18C18油脂、非極性干擾物等油脂、非極性干擾物等GCBGCB色素、甾醇、非極性干擾物等色素、甾醇、非極性干擾物等方法1：NY/T

21、761-2008 方法名稱及來源：方法名稱及來源：蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法甲酸酯類農藥多殘留檢測方法NY/T 761-2008NY/T 761-2008。 農藥種類和個數：農藥種類和個數：有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥等等共共104種。種。 使用儀器：使用儀器：GC、LC。 檢測步驟：檢測步驟：依次依次5mL丙酮丙酮+正己烷正己烷(10+90), 5mL正己烷預淋正己烷預淋4 mL甲醇甲醇二氯甲烷二氯甲烷(1+99)預淋預淋方法1：NY/T 761

22、-2008方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法名稱及來源：方法名稱及來源： NY/T 761-2008NY/T 761-2008、GB/T 19648-2006GB/T 19648-2006和和GB/T 20769-GB/T 20769-20082008等，其中以等，其中以GB/T 19648-2006GB/T 19648-2006為主。為主。農藥種類和個數：農藥種類和個數： 有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類和有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類和苯并咪唑類農藥等苯并咪唑類農藥等800800多種。多種。使用儀器：使用儀器： GCGC

23、、LCLC、GC-MS/MSGC-MS/MS和和LC-MS/MSLC-MS/MS。 檢測步驟：檢測步驟：5mL乙腈乙腈+甲苯預淋甲苯預淋剩余約剩余約20mL乙腈乙腈+甲苯分甲苯分次或次或1次倒入次倒入，淋洗小柱，淋洗小柱洗脫液用量洗脫液用量約為約為25mL25mL方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法方法2：NY/T 761、GB/T 19648和和GB/T 20769等綜合法方法方法

24、3：優化后的：優化后的QuEChERS Method方法名稱及來源：方法名稱及來源： 在美國農業部的在美國農業部的QuEChERSQuEChERS Method Method基礎上做了基礎上做了優化和調整。優化和調整。 農藥種類：農藥種類： 有機磷，有機氯，氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農有機磷，有機氯，氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農藥等多殘留檢測。藥等多殘留檢測。使用儀器：使用儀器： GC-MS/MS GC-MS/MS、LC/MS/MSLC/MS/MS。方法方法3：優化后的：優化后的QuEChERS Method原理原理： 與固相萃取與固相萃取(SPE)(SPE)相似，都是利用吸附劑填料與相似，都是利用吸附劑填料與基質中的雜質相互作用，吸附雜質從而達到除雜凈化基質中的雜質相互作用，吸附雜質從而達到除雜凈化的目的。的目的。優點優點： 回收率高，對大量極性及揮發性的農藥品種的回收率高，對大量極性及揮發性的農藥品種的回