1、藥品質量標準項目和分析方法王王 玉玉一一 質量研究一般原則質量研究一般原則二二 指標、限度和方法指標、限度和方法三三 雜質研究與方法雜質研究與方法四四 分析方法驗證、轉移分析方法驗證、轉移和確認和確認第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則質量標準的建立過程：1 確定質量研究的內容；2 方法學研究；3 確定質量標準的項目及限度；4 制訂及修訂質量標準。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（一）質量研究內容的確定質量研究是質量標準制訂的基礎，內容應盡可能全面，既要考慮一般性要求，又要有針對性。應根據產品（原料藥或制劑）的特性、制備工藝，并結合穩定性試驗結果。 第一部分第一

2、部分 質量研究一般原則質量研究一般原則1 藥物的特性 原料藥：結構、理化性質等。制劑：劑型特點、臨床、復方不同成分間的相互作用，以及輔料的影響(如防腐劑、抗氧劑或穩定劑等)。2 工藝的影響 原料藥：起始原料及試劑、中間體及副產物，及有機溶劑等。制劑：所用輔料、不同工藝的影響，以及降解產物等。還應考慮生產規模的不同對質量的影響。3 藥物的穩定性 應參考穩定性試驗結果，如貯藏過程中的變化和包裝材料對質量的影響。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（二）方法學研究 包括方法的選擇和方法的驗證。 根據選定的研究項目及試驗目的選擇試驗方法。可采用藥典收載的方法。鑒別項的專屬性；檢查項專屬性

3、、靈敏度和準確性；有關物質檢查和含量測定通常要采用兩種或兩種以上的方法進行研究，比較方法的優劣，擇優選擇。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（三）質量標準項目及限度的確定 應在充分的質量研究基礎上，根據藥物的特性確定。 既有通用性項目，又有針對產品自身特點的項目，能靈敏地反映質量的變化情況。 限度的確定基于安全性、有效性，還應注意生產產品與研究樣品質量的一致性。 一般雜質，可參照CHP或國外藥典確定其限度。特殊雜質，需限度確定的試驗或文獻的依據。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（四）質量標準的制訂 根據項目和限度，參照藥典，制訂出合理、可行的質量標準。藥品名稱

4、（通用名、漢語拼音名、英文名），化學結構式，分子式，分子量，化學名（對原料藥），含量限度，性狀，理化性質（原料藥），鑒別，檢查（原料藥純度檢查，與劑型相關的檢查等），含量（效價）測定，類別，規格（制劑），貯藏，制劑（原料藥），有效期等項內容。各項目應有相應的起草說明。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（五）質量標準的修訂臨床研究用質量限度應符合臨床研究安全性和有效性的要求；生產用試行質量標準可根據生產工藝研究或工業化生產規模產品質量的變化情況，結合臨床研究的結果對質量標準中的項目或限度做適當的調整和修訂；還要注重質量標準的實用性；質量標準試行期間，需繼續對項目的設置、采用的方法

5、及設定的限度進行研究，積累多批產品的實測數據，在試行標準轉正時進行修訂。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則三、藥物的質量研究 （一）質量研究用樣品和對照品 需采用多批樣品，其工藝和質量應穩定。臨床前:一定規模制備的樣品（至少3批）。臨床:中試或工業化生產規模的多批樣品。新對照品:結構確證和質量研究工作，并制訂質量標準，先自行標定。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（二）原料藥質量研究的一般內容1、性狀 1.1 外觀、色澤、臭、味、結晶性、引濕性等；1.2 溶解度；1.3 熔點或熔距；1.4 旋光度或比旋度；1.5 吸收系數；1.6 其他相對密度、凝點、餾程、折光

6、率、黏度碘值、酸值、皂化值、羥值等是脂肪與脂肪油類藥物的重要理化性質指標。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（二）原料藥質量研究的一般內容2、鑒別2.1 化學反應法 官能團專屬化學反應。2.2 色譜法 GC、HPLC、TLC。2.3 光譜法 IR、Raman、UV等。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則3、檢查 3.1 一般雜質 3.2 有關物質 3.3 殘留溶劑3.4 晶型、異構體 3.5 粒度 3.6 溶液的澄清度與顏色、溶液的酸堿度 3.7 干燥失重和水分 3.8 其他 如異常毒性、內毒素或無菌等。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（二）原料

7、藥質量研究的一般內容4、含量（效價）測定 凡用理化方法測定藥物含量的稱為“含量測定”，凡以生物學方法或酶化學方法測定藥物效價的稱為“效價測定”。 應選擇適當的方法對原料藥的含量（效價）進行研究。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（三）制劑質量研究的一般內容 1、性狀 考察樣品的外形和顏色。片劑是什么顏色的壓制片或包衣片，片芯的顏色，以及片劑形狀，如異形片；片面有無印字或刻痕或商標記號等。膠囊劑內容物的顏色、形狀等。注射液一般為澄明液體（水溶液），但也有混懸液或粘稠性溶液，需注意對顏色的描述，還應考察貯藏過程中性狀是否有變化。 第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（

8、三）制劑質量研究的一般內容 2、鑒別 通常采用靈敏度較高、專屬性較強、操作較簡便、不受輔料干擾的方法對制劑進行鑒別。鑒別試驗一般至少采用二種以上不同類的方法，如化學法和HPLC法等。必要時對異構體藥物應有專屬性強的鑒別試驗。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（三）制劑質量研究的一般內容3、檢查 制劑的檢查項目，除應符合制劑通則中規定外，還應根據特性、工藝及穩定性結果，制訂其他的檢查項目：如溶出度、釋放度，雜質等，含量均勻度；pH值、顏色，干燥失重或水分，大體積注射液檢查重金屬與不溶性微粒等，以及滲透壓摩爾濃度等檢查。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（三）制劑質

9、量研究的一般內容4、含量（效價）測定 通常應采用專屬、準確的方法對藥物制劑的含量（效價）進行測定。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（四）方法學研究1、方法的選擇及驗證的一般原則 應針對研究項目的目的選擇有效的質量研究用試驗方法。方法的選擇要有依據，包括文獻的、理論的及試驗的依據。常規方法或針對性方法，如不是中國藥典收載方法，應經過詳細的方法學驗證，確認方法的可行性。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（四）方法學研究2、常規項目試驗的方法 可參照中國藥典收載的方法，如溶解度、熔點、旋光度、吸收系數、重金屬、熾灼殘渣、溶液的澄清度與顏色、崩解時限、熱原、異常毒性、

10、不溶性微粒、融變時限、裝重量差異等。若采用與現行版藥典不同的方法，則應進行詳細的方法學研究。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則（四）方法學研究3、針對所研究藥品的試驗方法針對所研究藥品的試驗方法，如鑒別、雜質檢查、殘留溶劑檢查、制劑的溶出度或釋放度檢查，以及含量測定等，均應在詳細的方法學研究基礎上確定適宜的試驗方法，并進行方法學驗證。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則四、質量標準的制訂 （一）質量標準制訂的一般原則含檢測項目、方法和限度3方面內容。在質量研究基礎上，考慮安全性和有效性，以及生產、流通、使用等環節的影響，確定項目和限度，制訂出合理、可行的、能反映藥

11、品特征和質量變化的標準，以保證質量一致性及穩定性。應符合“準確、靈敏、簡便、快速”的原則，而且要有一定的適用性和重現性，還應考慮原料藥和其制劑質量標準的關聯性。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則四、質量標準的制訂（二）質量標準項目和限度的確定 1、質量標準項目確定的一般原則 既要通用性，又要有針對品自身的特點，并能靈敏地反映產品質量的變化情況。 2、質量標準限度確定的一般原則 首先應基于對藥品安全性和有效性的考慮，并應考慮分析方法的誤差。第一部分第一部分 質量研究一般原則質量研究一般原則四、質量標準的制訂 （三）質量標準的格式和用語 應按中國藥典和國家藥品標準工作手冊的格式和用

12、語進行規范，注意用詞準確、語言簡練、邏輯嚴謹。 （四）質量標準的起草說明是質量標準的注釋，如項目設置及限度確定的依據或項目不訂入的理由等。是研究工作總結，含方法的原理、方法學驗證、實際測定結果及綜合評價等。執行和修訂質量標準的重要參考資料。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法一一 性狀項性狀項 對性狀的描述很重要，既要嚴謹，又要實事求是、切合實際；即寬嚴適度。 1 原料藥原料藥固體原料藥：固體原料藥：本品為白色結晶性粉末；無臭，無味。本品為白色或類白色結晶性粉末；有類似蒜的臭氣，味酸；有引濕性。本品為白色至淺黃色結晶性粉末或顆粒。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法

13、 液體原料藥：液體原料藥：本品為無色的澄明液體或含無色的結晶塊；有強烈的特臭。本品為無色至微黃色油狀液體；微臭。溶解度溶解度：根據品種特性和檢測需要選擇適合的溶劑種類試驗，實事求是地描述，訂入標準中。如本品在熱水中溶解，在水中微溶，在乙醇中不溶，在稀鹽酸或氫氧化鈉溶液中溶解。必要時，可用無水甲醇和無水乙醇，一般用甲醇或乙醇。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法 2 制劑制劑 片劑：片劑：本品為白色片或類白色片；本品為糖衣片，除去包衣后顯白色或類白色；本品為薄膜衣片，除去包衣后顯類白色至淡黃色。 膠囊劑：膠囊劑：本品內容物為類白色至微黃色粉末或顆粒；本品內容物為淡黃色至淡棕黃色油狀

14、液體；本品內容物為白色球形小丸。 注射劑：注射劑：本品為無色澄明液體；本品為無色至微黃色的澄明液體；本品為無色至淡黃色的澄明油狀液體。 本品為白色凍干粉末，在水或氯化鈉注射液中呈白色顆粒懸浮液，靜置后顆粒沉降于瓶底；本品為白色凍干塊狀物或粉末。第二部分項目、限度和方法第二部分項目、限度和方法二二 鑒別項鑒別項 藥物的鑒別試驗藥物的鑒別試驗(identification test)是用于鑒別藥物的真偽，一般在藥品檢驗中作為首先項目。鑒別試驗主要用于證實鑒別對象是否為所標示的藥物，但常不用于鑒別未知物。 鑒別的主要項目鑒別的主要項目1、性狀：也可以列為鑒別項下，主要反映藥物特有的物理性質，如外觀、

15、臭、味、溶解度及其物理常數等。 其中溶解度、熔點、比旋度和吸收系數等或受被測物晶型、顆粒大小等因素影響，會使批間有差異；直接反映原料藥的質量，但也會影響制劑的質量。在制劑鑒別試驗中雖較少但有時也要考慮。 鑒別的主要項目鑒別的主要項目2、一般鑒別試驗(general identification test)是以藥物的化學結構及其物理化學性質為依據，通過化學反應來鑒別藥物的真偽。一般鑒別試驗可能只證實為某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物，需進行專屬鑒別試驗，方可確認。鑒別的主要項目鑒別的主要項目3、專屬鑒別試驗(specific identification test)是證實某一種藥物的依據，是根

16、據藥物間化學結構的差異及其物理化學特性的不同，選用某種藥物特有的靈敏定性反應來鑒別藥物的真偽。鑒別項的選擇鑒別項的選擇選擇原則： 專屬性 靈敏性 簡便性。原料藥：以光譜法和理化方法為主，色譜法為輔的組合；以振動光譜法為首選。制劑：以色譜法和理化方法為主，光譜法為輔的組合；色譜法較簡便、可靠。鑒別項的選擇鑒別項的選擇IR和Raman是最具專屬性的鑒別方法，是鑒別原輔料的首選方法；但用于制劑有局限性，要考慮輔料干擾，復方制劑API相互間以及輔料的干擾更為復雜。 IR或Raman制劑鑒別應用實例不多。前處理提純去除干擾是常用的方法；結合化學計量學、或采用微光譜（化學成像等）是進行制劑鑒別新方法。 其

17、他光譜法如紫外法、理化反應（顏色、沉淀）等在制劑鑒別中有一定的應用，但專屬性不強，色譜法，特別是HPLC法的應用實例越來越多。鑒別項選擇實例鑒別項選擇實例鑒別項選擇實例鑒別項選擇實例第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法三三 檢查項（檢查項（1原料藥）原料藥）原料藥檢查項的就是檢查原料藥的純度或所含雜質，主要有：溶劑殘留、有關物質、異構體和元素雜質；酸（堿）度 、溶液的澄清度與顏色 、溶液的透光率、氯化物 、硫酸鹽 、氰化物、硫化物、重金屬、熾灼殘渣、水分、干燥失重和熱原、微生物限度等。 不同品種有不同項目組合。溶劑殘留、有關物質（異構體）和無機元素雜質是重點和難點。另行討論 。第

18、二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法例1-溶液的澄清度與顏色溶液的澄清度與顏色 取本品5瓶，按標示量分別加水制成每1ml中含阿莫西林50mg的溶液，溶液應澄清無色；如顯渾濁，與2號濁度標準液（附錄IX B）比較，均不得更濃；如顯色，與黃色或黃綠色6號標準比色液（附錄IX A 第一法）比較，均不得更深。例2-堿性溶液的澄清度與顏色堿性溶液的澄清度與顏色 取本品0.5g，加氫氧化鈉試液5ml溶解后，加水5ml，溶液應澄清無色；如顯渾濁，與2號濁度標準液（附錄IX B）比較，不得更濃；如顯色，與黃色3號標準比色液（附錄IX A 第一法）比較，不得更深。第二部分第二部分 項目、限度和方法項

19、目、限度和方法例3-溶液的澄清度與顏色溶液的澄清度與顏色 取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液應澄清無色；如顯渾濁，照紫外-可見分光光度法（附錄IV A），在640nm的波長處測定，吸光度不得大于0.018；如顯色，與黃色1號標準比色液（附錄IX A 第一法）比較，不得更深。例4-三氯甲烷溶液的澄清度與顏色三氯甲烷溶液的澄清度與顏色 取本品1.0g，加三氯甲烷10ml溶解后，溶液應澄清無色。如顯色，與黃色3號標準比色液（附錄IX A 第一法）比較，不得更深。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法重金屬檢查法 重金屬檢查法有多種，有化學比色法、原子吸收分光光度法、原子熒光光度法、

20、ICP-OES、ICP-MS等。除原子熒光光度法外，上述方法在中國藥典中均有收載。本法系指在規定實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質：如鉛、汞、鉍、銻、砷、鈷、鎳、錫、鎘、鉬等。但以鉛的限量來表示重金屬限度。又分為3種檢查法，分別適用于不同的品種。USP33版、BP2010年、Ph.Eur.6.0和JP XV版也均采用硫代乙酰胺或硫化鈉作顯色劑，以鉛的限量來表示重金屬限度，但檢查方法（包括樣品消解處理）各有所不同。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法在建立重金屬檢查法時，或在檢驗中發現已有標準方法存在問題時，應進行方法學驗證，包括標準鉛加樣監控試驗，并根據方法學驗證

21、結果確定檢查方法中是否需要增設監控管，對于不適合采用本法檢查的重金屬，應另選用其他合適的方法進行檢查。微波消解法具有操作簡便、省時、重金屬損失小等優點，已廣泛應用于金屬元素測定的樣品前處理，但是必須選擇適宜的消解處理法及與其相適用的元素測定法，并經過相應的分析方法驗證方可使用。注意操作細節，提高可操作性和可行性。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法干燥失重測定法干燥失重測定法 烘干法烘干法 取供試品，精密稱定，除另有規定外，在105干燥至恒重。由減失的重量和取樣量計算供試品的干燥失重。 減壓干燥減壓干燥 用減壓干燥器（通常為室溫）或恒溫減壓干燥器（溫度應按各品種項下的規定設置，生

22、物制品除另有規定外，溫度為60），除另有規定外，壓力應在2.67kPa（20mmHg）以下。干燥器中常用的干燥劑為五氧化二磷、無水氯化鈣或硅膠；恒溫減壓干燥器中常用的干燥劑為五氧化二磷。應根據樣品特性選擇以上方法。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法干燥失重系指藥品在規定的條件下干燥后所減失重量的百分率。減失的重量主要為樣品在規定條件下失去的附著水和結晶水，也包括其他可揮發性物質如殘留溶劑等。藥品中水分可分為結晶水和附著水。結晶水的準確測定與否直接影響著化學結構的判定和含量測定的結果。藥品中水分含量的多少，對藥品的含量、穩定性、理化性質和藥理作用等均有影響，因此，對藥品中的水分進

23、行檢查并控制其限度非常重要。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法例例1 干燥失重干燥失重 取本品，以五氧化二磷為干燥劑，在70減壓干燥3小時，減失重量不得過1.0%（二部附錄VIII L）。例例2 干燥失重干燥失重 取本品，以五氧化二磷為干燥劑，在室溫減壓干燥至恒重，減失重量不得過7.0(一部附錄 G)。例例3 干燥失重干燥失重 取本品粗粉，置硫酸減壓干燥器內，干燥至恒重，減失重量不得過2.0(一部附錄G)。注意：一部干燥失重和水分測定的異同點。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法水分測定法（水分測定法（2015年版）年版）第一法第一法 (費休氏法費休氏法)A 容量

24、滴定法 主要用于化學藥品、注意溶劑的選擇。B 庫侖滴定法 主要用于含微量水分( 0.1)藥品的測定，特別適用于測定化學惰性物質如烴類、醇類和酯類中的水分。第二法第二法(烘干法烘干法) 第三法（減壓干燥法）第三法（減壓干燥法） 用于較貴重或特殊的化學藥和中藥（一、二法不適用）的水分測定。第四法第四法(甲苯法甲苯法) 主要用于中藥。第五法（氣相色譜法）第五法（氣相色譜法） 較少使用。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法美國藥典34版收載滴定法（分直接滴定法、剩余滴定法和庫侖滴定法）、甲苯法和重量法（即干燥失重法）。英國藥典收載滴定法、甲苯法和庫侖法等。2010年版水分測定收載費休氏法

25、（容量滴定法和庫侖滴定法）和甲苯法。日本藥局方收載方法同2010年版中國藥典。2015年版合并了一部、二部和三部。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法注意：1 卡氏法的適用性：容量法和庫侖法；2 選擇合適的卡氏法溶劑：醇化劑和堿化劑；3 烘干法、減壓干燥法和卡氏法在化學藥中應用區別；4 甲苯法 很少用于化學藥；5 氣相法 結果可靠，但操作、儀器不宜。應根據樣品特性和實際操作簡便性選擇。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法例例1 水分水分 取本品約0.2g，加10%咪唑的無水甲醇溶液使溶解，照水分測定法(附錄VIII M 第一法A)測定，含水分不得過6.0%。例例2

26、水分水分 取本品約0.5g，精密稱定，加無水甲醇-三氯甲垸（1：l20ml，使溶解，照水分測定法（附錄VIII M第一法A)測定，含水分不得過5.0%。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法例例3 水分水分 照水分測定法（附錄VIII M第二法），取甲苯250ml置A瓶中，加干燥氯化鋇10g; 另取本品l.0g , 用一小張玻璃紙包裹后置入A瓶，自“將儀器各部分連接”起，依法操作，檢讀水量，作為空白測定值；然后精密稱取本品約7g，用玻璃紙包裹后投入上述A瓶中，再依法緩緩加熱，直至水分完全餾出，放冷至室溫，檢讀第二次水量；兩者之差即為供試量中的含水量。含水分不得過52.0%。第二部分

27、第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法中國藥典中水分測定法與干燥失重法一部水分測定法分為四法，水分項下多采用第一法（烘干法）和第二法（甲苯法），用第三法（減壓干燥法）品種有3 個，用第四法（GC）品種僅有1個。采用干燥失重的品種較多。二部水分測定法分為兩法，照水分測定法有67個品種，66個采用第一法A（卡氏法容量法），僅有1個品種是采用第二法（甲苯法）。采用干燥失重的品種也很多。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法 水分測定、干燥失重法熱分析法 水分測定；與庫侖法的區別 晶型的考察； 熔點的測定； 分解溫度點的確定； 純度的測定; 含量等。第二部分第二部分 項目、限度和方法項

28、目、限度和方法三三 檢查項檢查項（2制劑，僅和制劑相關）制劑，僅和制劑相關） 制劑檢查項隨劑型不同而不同。重要的有： 固體制劑固體制劑：重量差異、片重差異、含量均勻度，崩解、溶出度和釋放度和有關物質（異構體、降解產物等雜質）等； 液體制劑液體制劑：可見異物，溶液顏色，澄清度，無菌，熱原、細菌內毒素檢查法和有關物質（異構體、降解產物等雜質）等。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法四四 含量測定含量測定1 原料藥：容量（重量）法首選，色譜法或紫原料藥：容量（重量）法首選，色譜法或紫外法次之，色譜法和紫外法的比較；外法次之，色譜法和紫外法的比較；2 制劑：無干擾時可選紫外法，色譜法在復

29、方制劑：無干擾時可選紫外法，色譜法在復方或已有有關物質方法時可首選，一般不用容量或已有有關物質方法時可首選，一般不用容量法；法； 3 充分利用容量法、紫外法和色譜法的特性和充分利用容量法、紫外法和色譜法的特性和優缺點；優缺點； 4 實驗研究要深入，不以表象否定方法。實驗研究要深入，不以表象否定方法。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法容量法要確定參加反應的是藥物分子活性部分，而不應是次要的酸根或堿基部分。如鹽酸西替立嗪，用氫氧化鈉液滴定時，測定的是其中鹽酸的含量，不能代表其活性成分有機堿的含量，這種方法不能準確把握其有效成分含量。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法

30、 （1）容量分析法的驗證：精密度；準確度：測定原料精制品（含量99.5%）的回收率（測定值與理論值的比值）計算；滴定終點確定的依據：包括滴定曲線的繪制，如用指示劑法確定終點，應用電位法校準終點顏色，提供指示劑顏色與電位變化情況的對比結果；耐用性。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法（2）HPLC法的驗證： 精密度； 準確度：回收率對原料藥無意義（比對），制劑回收率（必要）； 線性范圍； 專屬性：輔料、有關物質或降解產物峰應無干擾； 耐用性； 靈敏度：作為常量測定，無意義不作為（主要）要求。第二部分第二部分 項目、限度和方法項目、限度和方法（3）UV法的驗證： 精密度； 準確度：方

31、法和要求同HPLC法； 線性范圍； 專屬性：輔料、有關物質或降解產物峰應無干擾； 耐用性； 靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。原料藥回收率試驗無意義，可免做。結原料藥回收率試驗無意義，可免做。結果最好與用其他方法的結果比較。果最好與用其他方法的結果比較。第三部分第三部分 雜質研究與方法雜質研究與方法雜質研究雜質研究雜質研究涉及雜質分析方法的建立與驗證、雜質確認、雜質限度的確定及雜質控制等諸方面。一一 雜質定義和種類雜質定義和種類ICH將藥品中雜質按其屬性分為無機雜質、揮發性雜質和有機雜質三類。包括： 無機雜質無機雜質無機雜質可能來源于生產過程，它們通常是已知和已鑒定的，包括試劑、配位

32、體、催化劑，重金屬或其他殘留金屬，無機鹽，其他物質（如過濾介質、活性炭等）等。在新藥的研制過程中應對殘留催化劑進行評估，在標準中是否收載相應的檢查項目，應進行分析討論。標準限度應根據藥典標準或已知的安全性數據來制定。 無機雜質無機雜質采用 ICP-MS 分析各類陽離子，離子色譜分析陰離子的技術已相對成熟，但目前國內對無機雜質的控制要求仍相對簡單，將是一個重要的研究方向。USP制訂藥品重金屬或限量元素總體控制解決新方案，增加三個新通則：元素雜質-限度、元素雜質-測定法、膳食補充劑中的污染元素。 無機雜質無機雜質新通則目的是規定藥物中元素雜質含量的限度，這些元素以雜質存在于原料藥和制劑（包括天然物

33、和rDNA生物制品）、國家處方集的輔料、和美國藥典膳食補充劑綱要的膳食補充劑和營養成分中。膳食補充劑在通則-膳食補充劑中元素雜質（2232）中另有規定。 無機雜質無機雜質中元素雜質的每日允許暴露量（PDE）與ICHQ3D是一致的。在新通則中，著重描述了測定元素雜質的兩種常用方法：ICP-AES(方法1)和ICP-MS(方法2)，并提出選擇方法的原則。 揮發性雜質揮發性雜質目前的焦點是殘留溶劑分析，參照ICH“Q3C雜質：殘留溶劑的指導原則”，按照常用的69種有機溶劑對人體和環境的危害程度分為4類控制限度，是指在藥物合成中使用的（或用于制備溶液或混懸液的）有機或無機液體，由于它們一般具有已知毒性

34、，故較易選擇控制方法。根據各品種生產工藝確定控制對象；推薦采用頂空毛細管氣相色譜法進行分析檢測。 有機雜質有機雜質包括：起始物、副產物、中間體和降解產物等，如何按照QbD (quality by design)的指導思想，建立有效的分析方法并保證分析方法的耐用性則是有機雜質譜分析的關鍵。對于藥物制劑，需要進行控制的雜質還包括其活性組分的降解產物或活性組分與賦形劑和(或)內包裝/密封系統的反應產物。 有機雜質有機雜質 藥物中的雜質隨不同來源（不同生產廠或不同工藝過程）而異（見右圖）。 有機雜質有機雜質丁溴東莨菪堿含有酯鍵，在一定pH溶液中發生水解生成雜質。在注射劑工藝中用鹽酸調節pH值。采用HP

35、LC法測定不同pH條件下丁溴東莨菪堿降解產物托品酸濃度，根據數據擬合降解曲線（圖2），研究穩定性，可為生產和貯存提供重要的參考依據。二二 雜質研究主要思路雜質研究主要思路 制劑由至少一種API添加各種輔料（或不加）按一定工藝制成，其雜質包括原料藥帶入的雜質，在制劑制備過程和貯藏期間產生的降解產物，以及藥物之間、藥物與輔料之間相互作用產生的降解產物。由于制劑比原料藥所含雜質的來源具有多樣性，數目也可能要多，使制劑的雜質研究較原料藥復雜，復方制劑又較單方制劑更復雜。二二 雜質研究主要思路雜質研究主要思路確定各雜質的來源，對其定性和歸屬，限度確定必須以歸屬為基礎。如對于毒性雜質，需明確歸屬才能嚴格控

36、制，制定合理的限度。即使對于微量的未知雜質，由于來源于不同主藥，其可接受的限量可能不同，一般也應確定來源，除非雜質的量小于制劑中含量最小藥物可接受的未知雜質限量。 歸屬是雜質研究首先要解決的問題之一。二二 制劑雜質研究主要思路制劑雜質研究主要思路復方制劑有關物質控制基本原則和單方一樣，可看作是在做兩個或者三個產品，不過是同時分析幾個物質。相關的指導原則有ICH Q3A和Q3B和FDA相關的工業指南。首先通過對原料藥化學結構、理化性質、穩定性等分析，初步預測制劑中可能存在的降解產物（雜質的分析預測），然后通過進一步的試驗，對雜質來源進行歸屬。三三 雜質研究方法與步驟雜質研究方法與步驟 3. 1

37、文獻調研和資料收集文獻調研和資料收集 API生產廠的技術資料，一般有DMF的會提供可公開的部分，包括工藝流程，合成路徑和所有潛在雜質的信息。 同品種在USP、EP中的情況，如雜質種類和限量。 初步了解制劑中可能存在的潛在雜質和降解產物。 了解原研單位的相關資料和如何控制雜質的，如仿制藥的進口注冊標準是非常重要的信息。 3.2 雜質來源的分析預測雜質來源的分析預測原料藥引入的雜質不是制劑雜質研究重點，主要關注降解產物。通過對各原料藥化學結構、理化性質、穩定性等分析，初步預測可能存在的降解產物。如酯鍵、酰胺鍵易水解，通過分析可確定水解產生的雜質。原料藥及單方制劑穩定性試驗對（復方）制劑中雜質的預測

38、具重要參考意義，原料藥及單方制劑貯藏中易出現的降解產物在（復方）制劑中一般也會存在。如對原料藥穩定性及降解研究有助于確定不同制劑工藝（如是否接觸水分、是否經高溫處理、是否避光等）可產生的雜質；通過對各原料藥化學結構分析，可初步判斷主藥間是否存在作用而產生雜質。 3.3 建立可靠的分析方法建立可靠的分析方法分析方法是獲取雜質信息的重要手段，因此，要選擇合適的分析方法。分析方法的建立是一個復雜工程，原則就是方法要簡便、準確、重現性好、專屬性強。方法應能有效分離各雜質，靈敏度除應符合一般要求外，還要關注對制劑中含量較小的藥物所產生雜質的檢出能力。 含量測定和有關物質都有穩定性指示功能的要求，因此，含

39、量和有關物質測定一般采用相同的色譜條件。評價方法是否具有穩定性指示功能的主要依據就是stress study(破壞實驗)。 關注不同方法間的互補與驗證關注不同方法間的互補與驗證HPLC-UV法被認為是一種理想的檢測手段，在雜質研究中普遍采用，但是，對于雜質檢測來講，得到的色譜圖不一定能真實反映實際情況。 極性太強化合物可能被掩蓋(與溶劑峰重疊)，極性太小化合物保留在柱上難以被洗脫。 無紫外吸收不能被檢出，或在檢測波長處吸收相差較大的多種化合物不能被同時有效檢出。如圖A是某注射液穩定性考察中286nm檢測有關物質的色譜圖，圖B為改用230nm檢測的色譜圖。 關注不同方法間的互補與驗證關注不同方法

40、間的互補與驗證 關注不同方法間的互補與驗證關注不同方法間的互補與驗證檢測波長應兼顧主藥和各雜質的吸收情況來選擇，必要時在分別在特定波長下檢測特定雜質。對無紫外吸收的雜質，可改用其他類型檢測器，如選擇蒸發光散射檢測器，其靈敏度高于示差折光檢測器。ECD檢測器對于無紫外吸收的雜質檢測在靈敏度方面更具優勢，如USP30中阿奇霉素有關物質檢測在原HPLC-UV方法基礎上增加HPLC-ECD方法，并作為檢測結果的仲裁方法。 關注不同方法間的互補與驗證關注不同方法間的互補與驗證HPLC-MS應用已非常廣泛，但在標準中應用實例還不多，要從必要性、實用性和經濟性等方面考慮選擇。應注意不同原理的分析方法間的相互

41、補充與驗證，如HPLC與TLC的互相補充，反相HPLC系統與正相HPLC系統的相互補充，HPLC不同檢測器的相互補充等。藥物雜質多樣性決定了有時以現有技術難以使用一種檢測手段同時檢測所有雜質，如采用TLC法檢測無紫外吸收且極性過大的雜質，用HPLC法檢測其他雜質。 關注不同雜質色譜行為的差異關注不同雜質色譜行為的差異雜質比較復雜且多是未知物，極性、油/水分配等特性有時相差較大，等度洗脫法難以在較短時間完全洗脫所有雜質，梯度洗脫法可在較短時間內有效分離極性相差懸殊的物質。合適的梯度不僅可優化各物質保留時間，較短時間內全部洗脫各種雜質，同時還可改善峰形，提高檢測靈敏度。在國外雜質研究中廣為應用，呈

42、現出逐步取代等。但與等度法相比，梯度法操作復雜，可引起色譜基線漂移，影響結果精密度。如果等度法可有效檢出相關雜質，應作為首選，但方法學驗證中，梯度法在驗證等度法是否有效檢出所有相關雜質時具有重要意義。 采用新的雜質檢測手段采用新的雜質檢測手段國際上雜質研究不斷吸納分析科學新成就，色譜儀器越來越專業化（凝膠色譜、離子色譜、逆流色譜等相繼用于檢測），色譜與光譜聯用技術越來越成熟，如HPLC-UV、HPLC-MS、HPLC-NMR、GC-MS、GC-IR等已經成為最重要的方法，但是，在雜質結構分析鑒定中，各種光譜技術（UV、IR、MS、NMR和X-射線衍射法等）仍然是不可或缺的方法。各類數據庫越來越

43、豐富，聯機智能化解析系統越來越普及，為雜質研究提供了更為完善的利器。 采用新的雜質檢測手段采用新的雜質檢測手段雜質檢測逐步呈現出全面檢出（梯度洗脫，多檢測手段互補、明確靈敏度要求）、有效分離（規定最難分離物質對色譜峰的分離度）、目標明確（特定雜質、非特定雜質）、準確定量（外標、校正因子、歸一法相結合）的趨勢。反觀國內雜質研究情況則基本沿用十幾年一貫制的反相HPLC-UV組合的檢測方法，色譜柱仍局限于C8、C18及-CN等常規填料，洗脫方式基本采用簡單的等度洗脫法，對雜質定量也多為自身對照法，差距較為明顯。 4 雜質譜分析與雜質確認雜質譜分析與雜質確認以雜質譜為主線，以安全性為核心，將雜質研究與

44、化學、生產與控制、藥理毒理及臨床安全性研究等環節密切聯系，通盤考量。遺傳毒性雜質對細胞DNA產生損傷，不能僅研究主成分、還應包括雜質的遺傳毒性。雜質譜含所有雜質種類、含量、來源及結構等信息。通過雜質譜分析較為全面地掌握雜質概貌（包括來源和結構)；應確保雜質有效檢出和確認；跟蹤雜質譜對安全性或臨床試驗結果產生的影響，評估雜質可接受水平；結合生產時雜質譜的變化，評估雜質安全性風險，確立安全的雜質控制水平。 4 雜質譜分析與雜質確認雜質譜分析與雜質確認從制備工藝和產品結構分析入手，評估、預測可能存在的副產物、中間體、降解物以及試劑、催化劑等大體雜質概況，考證建立的分析方法是否能夠將它們逐一檢出，并進

45、行相應的驗證工作，是雜質研究的主動思維，而傳統的被動行為僅從建立的一種檢測方法所檢出的有關物質歸屬其來源情況，容易出現雜質漏檢的情況，難以全面掌握雜質譜。雜質譜分析對于合理確定雜質限度、降低雜質安全性風險具有重要意義。 4 雜質譜分析與雜質確認雜質譜分析與雜質確認雜質控制理念變遷為三個主要階段：純度控制：通過對純度控制間接實現雜質控制。雜質限度控制：單純的“限度控制”理念存在缺陷。雜質譜：諸雜質的種類與含量被總稱為雜質譜(impurity profiles)。理想的控制理念是針對藥品中每一個雜質，依據藥理、毒理學試驗結果和生理活性逐一制定其質控限度。在標準中按“雜質譜控制”的理念對藥品中雜質進

46、行控制是雜質控制的最終目標，而對雜質結構的推斷則是雜質研究/控制過程中最重要環節。 5 雜質限度確定的基本思路雜質限度確定的基本思路綜合藥學、藥理毒理及臨床研究結果綜合判定， 除用含雜質的 樣品也可用該雜質進行毒理試驗，為雜質限度的確定提供依據。某已知雜質的毒性文獻記載，可作為雜質限度確定的依據之一。對雜質的控制及其限度：還應考慮 非臨床安全性和臨床研究用樣品的雜質概況， 工藝穩定的具有一定代表性批次大生產產品的雜質概況匯總和分析。 5 雜質限度確定的基本思路雜質限度確定的基本思路確定雜質限度的基本原則是As Low As Reasonable Practicable (ALARP)，包括：

47、雜質的活性或毒性，是評估雜質可接受水平的核心要素，限度確定的首要依據。 工藝、生產中正常波動和制備工藝耐用性反映出的產品質量批內一致性和批間重復性。 分析方法能達到的檢測水平，可接受的誤差和精密度。 穩定性，產品儲運過程中控制降解的方法和措施，以及擬定貯藏條件下能使產品保持其規定質量指標的有效期。 6 異構體雜質異構體雜質藥物的異構體也常是藥物的雜質，應在藥品標準中進行控制。 手性異構體雜質控制 手性藥物質量研究的一個關鍵就是對藥物光學純度的控制。分析手性藥物光學純度的常用方法有：比旋度法、圓二色光譜法和手性色譜法。比旋度法較為簡單，但影響比旋度數值的因素較多，必要時，可采用圓二色光譜法和手性

48、色譜法，可以更為準確直觀地反映各立體異構體雜質的變化情況。 6 異構體雜質異構體雜質 互變異構體分析 在常溫下蘭索拉唑以I和II式兩種構型同時存在于溶液中，兩種構型間不斷翻轉互變，從而使部分BNR譜線變寬。溫度上升，兩種異構體翻轉互變速度不斷加快，I式與II式構型中某些信號化學位移逐步靠近，寬峰變窄，甚至合并成單峰；溫度的下降，兩種異構體翻轉互變速度下降，在丙酮中溫度降到70C后，化合物以一種穩定構型存在。四四 雜質歸屬研究的注意事項雜質歸屬研究的注意事項1 分別測定各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑樣品在確定的雜質檢查色譜條件下的HPLC圖譜，對上述圖譜進行對比研究，

49、以確定制劑色譜圖中輔料峰、由各原料藥引入的雜質峰。另外，可通過比較各原料藥的HPLC圖譜與原料藥混合物的HPLC圖譜初步確定原料藥之間是否有相互作用；通過比較原料藥混合物的HPLC圖譜、輔料的HPLC圖譜以及原輔料混合物的HPLC圖譜，可初步確定原輔料之間是否有相互作用；通過比較原輔料混合物的HPLC圖譜與制劑的HPLC圖譜，可初步確定制劑過程是否引起主藥的降解和雜質的增加。四四 雜質歸屬研究的注意事項雜質歸屬研究的注意事項2 對各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進行光、熱、濕影響因素試驗，測定試驗前后樣品的HPLC圖譜并進行比較分析，可明確制劑中藥物在強光、高溫、

50、高濕條件下的主要降解產物，對（復方）制劑中的降解產物進行歸屬，并可通過上述比較研究，基本確定藥物與藥物之間、藥物與輔料之間在劇烈條件下是否存在相互作用，是否產生新的雜質。四四 雜質歸屬研究的注意事項雜質歸屬研究的注意事項3 對各原料藥、原料藥混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進行穩定性加速試驗（試驗條件一般選擇40，相對濕度75），測定不同時間樣品的HPLC圖譜并進行比較分析，并與制劑長期留樣試驗樣品的測定結果進行比較。通過這些研究工作，可進一步明確（復方）制劑中各雜質的歸屬，明確藥物在加速試驗條件下及一般貯藏條件下的主要降解產物，為確定貯藏條件及質量控制重點建立基礎。第四部分第四部分 質量

51、分析方法驗證質量分析方法驗證 藥品檢驗方法驗證的重要性藥品檢驗方法驗證的重要性設計的檢驗方法應能達到預期的效果，保證測定結果準確可靠，確保藥品的安全有效。CHP藥品質量標準分析方法驗證指導原則，藥審中心-化學藥物質量控制分析方法，USP通則1225藥典分析方法驗證、通則1226藥典分析方法確認，均依照ICH Q2(R1)。USP明確規定：分析方法驗證：建立方法要驗證，修訂方法要驗證；分析方法確認：應用方法時要確認方法是否適用。 驗證的目的（驗證的目的（CHP）“是證明采用的方法適合于相應檢測要求。在建立藥品質量是證明采用的方法適合于相應檢測要求。在建立藥品質量標準時，分析方法需經驗證；在藥品生

52、產工藝變更、制劑標準時，分析方法需經驗證；在藥品生產工藝變更、制劑的組分變更、的組分變更、中藥處方變更中藥處方變更、原分析方法進行修訂時，則、原分析方法進行修訂時，則質量標準分析方法也需進行驗證。方法驗證理由、過程和質量標準分析方法也需進行驗證。方法驗證理由、過程和結果均應記載在藥品質量標準起草說明或修訂說明中。結果均應記載在藥品質量標準起草說明或修訂說明中。生物制品質量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物生物制品質量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物學測定方法，其中理化分析方法的驗證原則與化學藥品基學測定方法，其中理化分析方法的驗證原則與化學藥品基本相同，所以可參照本指導原則進行，但在

53、進行具體驗證本相同，所以可參照本指導原則進行，但在進行具體驗證時還需要結合生物制品的特點考慮；生物學測定有更多的時還需要結合生物制品的特點考慮；生物學測定有更多的影響因素，一般要使用動物、細胞或生物分子，因此對于影響因素，一般要使用動物、細胞或生物分子，因此對于生物學測定的判斷標準另作說明。生物學測定的判斷標準另作說明。” 需驗證的項目和內容（CHP）分析項目：分析項目：鑒別試驗、雜質限度檢查或定量檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分(如防腐劑等，中藥中如殘留物、添加劑等中藥中如殘留物、添加劑等）的測定。藥品溶出度、釋放度等檢査中，其溶出量等的測試方法也應進行必要驗證。驗證

54、內容：驗證內容：準確度、精密度（包括重復性、中間精密度和重現性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。視具體方法擬訂驗證的內容。ICH需驗證的分析類型（項目）和驗證的分析特性(內容)和中國藥典相似。 一一 準確度準確度 （1 含量測定方法的準確度）含量測定方法的準確度）原料藥可用已知純度的對照品或供試品進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定的結果進行比較。制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測物（原文可用含已知量被測物的各組分混合物）進行測定。如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測制劑中加入已知量的被測物進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定結果進行比

55、較。如已測試并求出了精密度、線性和專屬性，在準確度也可推算出來的情況下，此項可豁免驗證。 一一 準確度準確度 （2 雜質定量測定的準確度）雜質定量測定的準確度）可向原料藥或制劑處方量空白輔料中加入已知量雜質進行測定。如不能得到雜質或降解產物對照品，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經過驗證的方法。 測定雜質或降解產物含量時，可采用加校正因子的主成分自身對照法。在無法獲得雜質或降解產物的校正因子的情況下，或校正因子可以忽略時，也可采用不加校正因子的主成分自身對照法。應明確表明單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（%）或面積比（%）。 一一 準確度準確度 （3 中藥測定方

56、法的準確度中藥測定方法的準確度）可用已知純度的對照品進行加樣回收率測定，即于已知被測成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測成分對照品，依法測定。用實測值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計算回收率。在加樣回收試驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標準曲線線性范圍之內；加入的對照品的量要適當，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差。回收率=（C-A）/B100%式中A為供試品所含被測成分量；B為加入對照品量；C為實測值。 一一 準確度準確度 （4 校正因子的準確度校正因子的準確度）對色譜方法而言，絕對(或定量)校正因子是指單位面積的色譜峰

57、代表的待測物質的量。待測定物質與所選定的參照物質的絕對校正因子之比，即為相對校正因子(簡稱校正因子)。參照物質又稱為參比物質或替代物；通常以主成分作為參照物質，也可選擇其他成分或加入的任一物質作為參照物質。校正因子計算法常用于化學藥有關物質的測定、中藥材及其復方制劑中多指標成分的測定。校正因子的表示方法很多，本指導原則中的校正因子是指氣相色譜法和高效液相色譜法中的相對重量校正因子。校正因子可采用參照物質對照品和待測物對照品標準曲線斜率比值進行比較獲得；采用紫外吸收檢測器時，可將參照物質對照品和待測物對照品在規定的波長和溶劑條件下吸收系數比值進行比較來計算獲得。 一一 準確度準確度 （5 數據要

58、求數據要求）在規定范圍內，取相當于100%濃度水平的供試品，用至少6次的結果進行評價；或設計3個不同濃度，每個濃度分別制備3份供試品溶液，用9個測定結果進行評價。化學藥，一般中間濃度加入量與待測定成分量之比控制在1:1左右，高、中、低濃度對照品加入量在1.2:1，1:1，0.8:1左右，應報告已知加入量的回收率（%），或測定結果平均值與真實值之差及其相對標準偏差或可信限；對于中藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比在1.5:1，1:1，0.5:1左右，應報告供試品取樣量、供試品中含有量、對照品加入量、測定結

59、果和回收率（%）計算值，以及回收率（%）的相對標準偏差（RSD%）或可信限（置信度，又稱置信水平，設定值是95%。）。對于校正因子，應報告測定方法、測定結果和相對標準偏差（RSD%）。 一一 準確度準確度 （ 樣品中待測成分含量與回收率限度樣品中待測成分含量與回收率限度） 二二 精密度精密度精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度稱為重復性；在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果之間的精密度，稱為中間精密度；在不同實驗室由不同分析人員測定結果之間的精密度，稱為重現性。含量測定和雜質的定量測定應考慮方法的精密度。 二二 精

60、密度精密度1.重復性在規定范圍內，取同一濃度（相當于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6次的結果進行評價；或設計3個不同濃度，每個濃度分別制備3份供試品溶液進行測定，用9個測定結果進行評價。2.中間精密度為考察隨機變動因素對精密度的影響，應設計方案進行中間精密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設備。 二二 精密度精密度3.重現性法定標準采用的分析方法，應進行重現性試驗。例如，建立藥典分析方法時，通過協同檢驗獲得重現性結果。協同檢驗的目的、過程和重現性結果均應記載在起草說明中。應注意重現性試驗用樣品質量的一致性及貯存運輸中的環境對該一致性的影響（原文：應注意重現性試驗用樣品本身質