1、 學習情境學習情境2 2 微生物的接種、分離與培養及技術微生物的接種、分離與培養及技術子學習情境子學習情境2.1 2.1 玻璃器皿的清洗包扎及滅菌玻璃器皿的清洗包扎及滅菌 一、目的要求一、目的要求 1 1、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培養皿的、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培養皿的包扎方法；包扎方法；2 2、掌握干燥滅菌、濕熱滅菌的原理和方法。、掌握干燥滅菌、濕熱滅菌的原理和方法。二、基本原理二、基本原理 實驗室中使用的玻璃器皿簡介實驗室中使用的玻璃器皿簡介 微生物學實驗所用的玻璃器皿，大多要進行消毒、滅菌微生物學實驗所用的玻璃器皿，大多要進行消毒、滅菌和用來培養微生物，因此

2、對其質量、洗滌和包裝方法均有一定和用來培養微生物，因此對其質量、洗滌和包裝方法均有一定的要求。玻璃器皿的質量一般要求的要求。玻璃器皿的質量一般要求硬質玻璃硬質玻璃，才能承受高溫和，才能承受高溫和短暫灼燒而不致破壞；玻璃器皿的短暫灼燒而不致破壞；玻璃器皿的游離堿含量要少游離堿含量要少，否則會影，否則會影響培養基的酸堿度；對玻璃器皿的響培養基的酸堿度；對玻璃器皿的性狀和包裝方法的要求性狀和包裝方法的要求，以，以能防止污染雜菌為準；能防止污染雜菌為準；洗滌洗滌玻璃器皿的方法不當也會影響實驗玻璃器皿的方法不當也會影響實驗的結果。目前微生物學實驗室中，有些玻璃器皿（如培養皿、的結果。目前微生物學實驗室中

3、，有些玻璃器皿（如培養皿、吸管等）已被吸管等）已被一次性塑料制品一次性塑料制品所代替，但玻璃器皿仍是重要的所代替，但玻璃器皿仍是重要的實驗室用具。實驗室用具。 清洗清洗包裝包裝滅菌滅菌洗滌劑、試管刷等洗滌劑、試管刷等報紙、牛皮紙、專用塑料袋或器皿等報紙、牛皮紙、專用塑料袋或器皿等干熱滅菌干熱滅菌 濕熱滅菌濕熱滅菌 紫外滅菌紫外滅菌 過濾過濾玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗器皿包扎器皿包扎 實驗室常用的滅菌方法有干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法、實驗室常用的滅菌方法有干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法、紫外線照射法和微孔濾膜法等。紫外線照射法和微孔濾膜法等。干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌是利用高溫使微生物細胞內的蛋干熱滅

4、菌和高壓蒸汽滅菌是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。白質凝固變性而達到滅菌的目的。紫外線殺菌機制主要是因為它誘導了胸腺嘧啶二聚體的形紫外線殺菌機制主要是因為它誘導了胸腺嘧啶二聚體的形成和成和DNADNA鏈的交聯，從而抑制了鏈的交聯，從而抑制了DNADNA的復制。的復制。過濾除菌是通過機械作用濾去液體或氣體中細菌的方法。過濾除菌是通過機械作用濾去液體或氣體中細菌的方法。 （三）滅菌的常用方法和基本原理（三）滅菌的常用方法和基本原理 高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，

5、然后關閉排氣閥，繼續加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。 紫外線滅菌是用紫外線燈進行的，波長為紫外線滅菌是用紫外線燈進行的，波長為200300nm200300nm的紫外線都有殺的紫外線都有殺菌能力，其中以菌能力，其中以260nm260nm的殺菌力最強。在波長一定的條件下，紫外線的殺的殺菌力最強。在波長一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機制主要是因為它誘導菌效率與強度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機制主要是因為它誘導了了胸腺嘧啶二聚體胸腺嘧啶二聚體的形成，從而抑制了的形成

6、，從而抑制了DNADNA的復制。另一方面，由于輻射的復制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成能使空氣中的氧電離成OO，再使，再使O O2 2氧化生成臭氧（氧化生成臭氧（O O3 3）或使水（）或使水（H H2 2O O）氧）氧化生成過氧化氫（化生成過氧化氫（H H2 2O O2 2），），O O3 3和和H H2 2O O2 2均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所以，所以，只適用于無菌室、接種箱、手術室內的空氣及物體表面的滅菌只適用于無菌室、接種箱、手術室內的空氣及物體表面的滅菌。紫外線燈距照射物以不超過紫外線燈距照射物以不超過1 12m2m為宜。為宜。 此外

7、，為了加強紫外線滅菌效果，在打開紫外線燈以此外，為了加強紫外線滅菌效果，在打開紫外線燈以前，可在無菌室內（或接種箱內）噴灑前，可在無菌室內（或接種箱內）噴灑3535的石炭酸的石炭酸溶液，一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一溶液，一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方面也可以殺死一部分細菌。無菌室內的桌面，凳子可方面也可以殺死一部分細菌。無菌室內的桌面，凳子可用用2323的來蘇爾擦洗，然后再開紫外線燈照射，即可的來蘇爾擦洗，然后再開紫外線燈照射，即可增強殺菌效果，達到滅菌目的。增強殺菌效果，達到滅菌目的。結合理論知識結合理論知識和生活，在使和生活，在使用紫外滅菌時用紫外滅菌時你應該注意什你應該注意什么？么？三、實驗器材三、實驗器材 儀器和其他用品：試管、三角燒瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、儀器和其他用品：試管、三角燒瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養基分裝