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文檔簡介

1、編輯課件技術路線編輯課件雙光子激光建立斑馬魚脊髓損傷模型的探索：明場下對脊髓定位，利用雙光子強激光對脊髓進行深度掃描切割損傷5小時后通過行為學軟件分析損傷后的運動能力，判斷損傷程度對損傷后的斑馬魚進行解剖，觀察掃描處的脊髓及周圍組織的損傷情況14dpf 幼年斑馬魚0.033%MS222麻醉同時在損傷位點以下2mm注射反向示蹤劑生物胞素12小時后做縱切切片，利用生物胞素抗體做免疫染色判斷損傷的位置與大小是否與符合判斷膠質斑痕的位置與大小是否符合12小時后做縱切切片，利用GAFP抗體和纖連蛋白抗體做免疫染色編輯課件前期實驗：手術建模：手術組（n=68）假手術組（n=68）建模成功性分析：每周分析術

2、后運動能力，連續跟蹤7周基因芯片分析：提總RNA分析全部基因的表達水平，統計分析各個基因表達變化定量PCR：提總RNA反轉錄檢測sema4e和plxnd1 相對內參GADPH表達水平的變化原位雜交：制作切片制作探針檢測sema4e和plxnd1 mRNA的表達水平變化及表達細胞Westen Bolt：提總蛋白檢測sema4e和plxnd1蛋白表達水平的變化取脊髓（損傷位點以下1cm）：術后4hour, 12hour, 6day, 11day組編輯課件sema4e與plxnd1關系研究：sema4e活性片段DNA的擴增sema4e特異性肽段的設計與合成sema4e表達載體的構建表達載體的導入轉染

3、細胞的篩選與培養表達蛋白的提取表達蛋白的活性檢測sema4e免疫磁珠的制作sema4e與plxnd1免疫共沉淀噬菌體展示技術淘選抗體ELISA檢測抗體活性ELISA檢測抗體專一性sema4e與plxnd1免疫共定位編輯課件sema4e與plxnd1在斑馬魚脊髓損傷修復中的作用研究：編輯課件前期結果編輯課件Before lesionRed: sham operation (n=10)Blue: operation (n=10)圖1：斑馬魚脊髓損傷后的運動能力的變化編輯課件Real time PCRtime pointschange folds編輯課件10X10X10X10X10Xanti-sense probes sham 4hour 12hour 11day10X10X10Xanti-sense probes sham 4hour 12hour 11daysema4e:plxnd1:10X10X編輯課件通過雙光子顯微鏡活體觀察斑馬魚脊髓內的血管編輯課件plxnd1

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