1、第卷第期年月南京醫科大學學報（自然科學版）（）參赤提取物對BSA致大鼠實驗性肝纖維化的作用研究明志君，曹莉，王文祥，陳可冀（蘇州大學藥學院，中國中醫研究所，江蘇蘇州）摘要方目的：觀察參赤提取物對牛血清白蛋白（）致大鼠肝纖維化的治療作用，為臨床應用參赤提取物提供理論依據。法：采用靜脈注射免疫性誘導大鼠肝纖維化模型。造模后，給予大鼠胃飼參赤提取物。檢測大鼠血清肝功能及與肝纖維化相關的部分指標、肝組織羥脯氨酸含量（），并對肝組織進行病理學觀察。結果：參赤提取物可使免疫性誘導的肝組織纖維增生、變性和壞死明顯減輕。參赤提取物各組大鼠血清、及肝組織羥脯氨酸含量與模型組比較均顯著降低；除低劑量組外，其余各給

2、藥組大鼠血清較模型組顯著升高。結論：參赤提取物具有保護肝細胞，維護肝功能，抗肝纖維化的作用，其作用機理與膠原代謝有直接的關系。關鍵詞參赤提取物；肝纖維化；牛血清白蛋白中圖分類號文獻標識碼文章編號（），（，）：（），（，）：，（），（），（），（），（），（）（）（）：；，（）：肝纖維化是指肝臟的慢性、實質性病變，在病理組織學上有廣泛的肝細胞壞死、再生及再生結節形成，結締組織增生，導致肝小葉結構破壞等。肝纖維化是各種慢性肝病發展為肝硬化的必經階段，有效地預防、逆轉肝纖維化可以延緩或防止肝硬化發生。近年來，國內學者在中醫藥防治肝維化方面取得了一定的效果。參赤提取物為赤芍（）和丹參（）的提取物，國內

3、外已有赤芍和丹參治療肝纖維化的相關報道。本文將它們的提取物按一定比例混合，對其進行了抗肝纖維化的實驗研究，并進一步探索其作用機制，為新藥的研發提供實驗資料。材料和方法主要藥物及試劑參赤提取物（丹參提取物和赤芍提取物按重量比混合），來源于北京金橋時代生物制品研究發展中心，批號：。將藥物配制成不同濃度，南京醫科大學學報第卷第期年月置冰箱保存。秋水仙堿購自昆明股份制藥有限公司產品，批號：。牛血清白蛋白（）購自上海源聚生物科技有限公司，進口分裝（上海羅氏制藥出品），批號：。福氏不完全佐劑為上海檢測西巴斯生物開發有限公司產品，批號：。試劑：、放免試劑盒為上海海軍醫學研究所常規檢測試劑。肝組織羥脯氨酸檢測

4、試劑購自南京建成生物工程研究所，批號：相應的藥物，正常組和模型組給予等量的生理鹽水，治療天。觀測指標末次給藥后，乙醚麻醉，取血，檢測血清、及膠原的含量；取肝臟稱重，計算肝重系數；每只稱取肝臟，制備肝勻漿，用于肝組織羥脯氨酸測定；取左葉肝臟置福爾馬林溶液中固定，染色，進行病理組織學觀測。血清、按常規臨床檢測方法檢測，、用放射免疫法測定。肝組織羥脯氨酸按試劑盒方法測定。實驗動物大鼠，雌雄各半，體重（±），由蘇州大學實驗動物中心提供。模型制備及給藥分組統計學方法數據以均數±標準差（±）表示，采用大鼠只，雌雄各半，分為組（每組只）：正常組、模型組、秋水仙堿組、參赤高劑量組

5、、參赤中劑量組及參赤低劑量組。除正常組外，大鼠采用朱啟貴等的方法制備免疫性肝纖維化模型：將牛血清白蛋白（）的生理鹽水與等量福氏不完全佐劑充分混勻，制成乳懸液。給予大鼠皮下多點注射，共次。第、次間隔周，其后隔周次；末次免疫后周開始，尾靜脈注射，首次每只，每周次，其后濃度逐漸升至每只每次多組資料間比較采用方差分析，軟件進行處理。肝組織纖維化程度采用等級序值統計法。結果參赤提取物對肝功能指標的影響除參赤低劑量組外，其余給藥各組血清較模型組有顯著升高（），各給藥治療組大鼠的血清及均明顯降低，與模型組相比差異均有顯著性（，表）。（，±），共次。造模后，各給藥組灌胃給予表組別正常組模型組秋水仙堿

6、組參赤高劑量組參赤中劑量組參赤低劑量組參赤提取物對所致免疫性肝纖維化大鼠肝功能檢測的影響劑量（）（）±±±±±±（）±±±±±±（）±±±±±±（）±±±±±±與正常組比較，；與模型組比較，。影響參赤提取物對血清中與肝纖維化相關指標的給藥各組大鼠血清中、與模型組比較均顯著降低（，），見表。表組別正常組模型組秋水仙堿組參赤高劑量組參赤中劑量組參赤低劑量組參赤提

7、取物對所致免疫性肝纖維化大鼠血清中相關指標的影響劑量（）（，±）（）±±±±±±（）±±±±±±（）±±±±±±（）±±±±±±與正常組比較，；與模型組比較，。第卷第期年月明志君等：參赤提取物對致大鼠實驗性肝纖維化的作用研究參赤提取物對大鼠肝組織羥脯氨酸的影響給藥各組肝組織羥脯氨酸含量與模型組比較均討論有顯著降低（，），且呈較為明顯的劑量依賴性（表

8、）。表參赤提取物對所致免疫性肝纖維化大鼠肝組織羥脯氨酸的影響組織正常組模型組秋水仙堿組高劑量組中劑量組低劑量組幾乎所有的慢性肝病均具有肝纖維化，進一步發展可形成肝硬化，嚴重影響患者健康與生命。肝纖維化是一個動態的過程，屬可逆性病變。阻斷、抑制或逆轉肝纖維化是治療慢性肝病的重要目標。目前治療主要從三方面入手：去除病因，防止原發病的損傷病因治療是抗肝纖維化最有效措施之一；針對肝星狀細胞（）活化和膠原代謝的抗纖維化治療；肝纖維化細胞因子和基因的治療。中醫抗肝纖維化是我國的特色和優勢，臨床應用廣泛。其作用機制常包括保護肝臟功能、抑制炎癥反應、調節免疫反應、促進肝細胞再生、抑制膠原合成和促進膠原分解等多

9、個環節。有研究表明，中醫活血化瘀法能顯著減少肝膠原纖維總量及、型膠原沉積作用，并有明顯的保護肝細胞作用。有臨床報道靜脈滴注丹參注射液可明顯降低患者血清（，±）劑量（）肝羥脯氨酸（）±±±±±±與正常組比較，；與模型組比較，。參赤提取物對靜脈注射引起的肝纖維化正常組大鼠肝組織未見異常，模型組大鼠肝組大鼠肝臟病理組織學的影響織絕大部分呈級纖維化，有肝細胞脂肪變性和灶性壞死。參赤提取物各劑量組治療效果顯著，且高劑量組最好，大部分大鼠肝組織為級纖維增生，肝細胞變性和壞死均有不同程度的減輕，與模型組比有統計學意義（，表，圖，封三）。表

10、、一水平。丹參還可以抑制的活化與增殖，減少的合成，減低肝組織勻漿羥脯氨酸的含量，抑制膠原纖維特別是型膠原的增生，阻止纖維化的過程。也有研究表明復方的赤芍湯可顯著降低大鼠血清、水平，減輕肝細胞脂肪變性及炎性細胞浸潤，抑制（）肝纖維化壞死參赤提取藥物對致肝纖維化大鼠的病理觀察肝細胞組別水腫脂肪變正常組模型組秋水仙堿組高劑量組中劑量組低劑量組與正常組比較，；與模型組比較，。膠原纖維的合成與沉積的作用。參赤提取物為丹參和赤芍提取物，配伍臨床上治療肝纖維化，具有良好的療效。本研究用尾靜脈注射誘導建立實驗性肝纖維化模型，其主要原理是異種血清蛋白進入機體引發免疫應答，在肝臟主要是在門靜脈匯管區形成免疫復合物

11、沉積，沉積的免疫復合物引起局部炎性反應，激發各種細胞因子的產生，使肝星狀細胞轉變為肝纖維母細胞，分泌大量胞外基質，發生纖維化，此類模型為免疫性損傷，相對其他模型，整體損傷更小，更接近肝纖維化臨床病例的發病機制，是一種理想的實驗性肝纖維化模型。本研究利用該種肝纖維化動物模型，考察了參赤提取物對肝纖維化的治療作用。實驗結果表明：參赤提取物可明顯改善肝纖維化模型大鼠的肝功能，降低血清中、水平，并可降低肝組織勻漿羥脯氨酸的含量。病理組織學檢查結果顯示：大鼠長期注射后，肝細胞受到損傷，局部出現南京醫科大學學報第卷第期年月炎癥、壞死，發生纖維化。參赤提取物各劑量組治療效果顯著，肝細胞變性和壞死均有不同程度

12、的減輕，說明參赤提取物對誘導的免疫性大鼠肝纖維化具有一定的治療作用。其作用機理還有待進一步的探討。參考文獻合雜志，（）：宋家武，李紹白，張文榮血府逐瘀湯抗大鼠肝纖維化作用的研究中西醫結合肝病雜志，（）：葉峰，劉昳，邱根全，等不同劑量丹參注射液治療肝硬化的臨床研究中藥材，（）：蔡方剛，林永堃，翁山耕，等丹參對大鼠肝量狀細胞轉化生長因子與型膠原表達的影響中國現代醫學雜志，（）：陶艷艷丹參及其化學成分抗肝纖維化作用機制研究進展中西醫結合學報，（）：，：李延昌，孫玉鳳，馮志杰，等赤芍抗肝纖維化的實驗研究中國中西醫結合雜志，（）侯長利復方甘草酸苷聯合丹參抗肝纖維化療效觀察中國藥房，（）：朱啟貴，方步武，竺稽能牛血清白蛋白致免疫性肝纖維化動物模型