1、基因工程拔高訓練一、選擇題1人的血紅蛋白中有一種一珠蛋白，它的基因有1700個堿基對，其中有3個外顯子，2個內含子，能編碼146個氨基酸，下列敘述正確的有翻譯蛋白質的信使RNA堿基數量多于438個 三個外顯子的堿基數量約占整個基因的26非編碼區是兩個基因之間沒有遺傳效應的區段 內含子將編碼區和非編碼區隔開RNA聚合酶的結合位點位于非編碼區A B C D答案 A2.基因工程常用的受體細胞有 大腸桿菌 枯草桿菌 支原體 動植物細胞A. B. C. D.答案 D3甲、乙兩圖表示從細菌細胞中獲取目的基因的兩種方法，以下說法中錯誤的是A甲方法可建立該細菌的基因組文庫 B乙方法可建立該細菌的cDNA文庫C

2、甲方法要以核糖核苷酸為原料 D乙方法需要逆轉錄酶參與答案C4 PCR技術通過對目的基因進行擴增，可以得到大量的目的基因，下面對該技術的敘述，不正確的是A遵循的基本原理是DNA半保留復制和堿基互補配對B擴增儀內必須加入引物、原料和DNA聚合酶C每擴增一次，溫度都要發生907555的變化D成指數式擴增，約為2n（n為擴增次數）答案 C5（10白牛高中模擬）下圖示真核生物染色體組成， 1、2、3、4分別表示（）A.胸腺嘧啶、非編碼區、內含子、外顯子 B.胸腺嘧啶、非編碼序列、外顯子、內含子C.尿嘧啶、非編碼區、外顯子、密碼子 D.尿嘧啶、非編碼序列、內含子、外顯子答案A6.下列圖中關于P、Q、R、S

3、、G的描述，正確的是 AP代表的是質粒RNA，S代表的是外源DNABQ表示限制性內切酶的作用，R表示RNA聚合酶的作用CG是RNA與DNA形成的重組質粒DG是轉基因形成的重組DNA質粒答案D7DNA分子有兩條鏈組成，兩鏈是反向平行的。每條鏈連接磷酸基團的一端用5作標記。另一端標記為3，下列四條DNA分子片段中，可以和R片段之間通過粘性末端結合的是（ ）A B C D答案C8.下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發生的變化，圖中依次表示限制性內切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是A、 B、 C、 D、答案 C.9.質粒是基因工程中最常用的運載體，它存在于許多細菌體內。質粒上有標

4、記基因如圖所示，通過標記基因可以推知外源基因（目的基因）是否轉移成功。外源基因插入的位置不同，細菌在培養基上的生長情況也不同，下表是外源基因插入位置（插入點有a、b、c），請根據表中提供細菌的生長情況，推測三種重組后細菌的外源基因插入點，正確的一組是 細菌在含青霉素培養基上生長情況細菌在含四環素培養基上生長情況能生長能生長能生長不能生長不能生長能生長A是c；是b；是a B是a和b；是a；是bC是a和b；是b；是a D是c；是a；是b答案 A.10.基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質粒，便于重組和篩選。已知限制酶I的識別序列和切點是GGATCC ，限制酶II的識別序列和切點是GATC

5、。根據圖示判斷下列操作正確的是 注：GeneI 和Gene 表示兩種標記基因 表示限制酶僅有的識別序列放大GGATCCCCTAGGGATCCTAG目的基因GGATCCCCTAGGGene IGene IIGATCCTAGA質粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割B質粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割C目的基因和質粒均用限制酶切割D目的基因和質粒均用限制酶切割答案A11 “X基因”是DNA分子上一個有遺傳效應的片段，若要用PCR技術特異性地拷貝“X基因”，需在PCR反應中加入兩種引物，兩種引物及其與模板鏈的結合位置如圖1所示。經4輪循環后產物中有五種不同的DNA分子，如圖2所示，其中第種DNA分

6、子有幾個：（ ）A、2 B、4 C、6 D、8答案D12.（10內鄉一高月考）花粉粒通道法是指利用植物受精后花粉萌發形成的花粉管通道，將目的基因導入尚不具備細胞壁的合子，形成含有目的基因的胚。經培養、篩選，可獲得有特定性狀的轉基因植株。下列有關說法中不正確的是( )A為了減少盲目性，可以通過人工合成的途徑來獲得目的基因B目的基因導入受體細胞后，通過植物組織培養才能獲得相應的植株C所得轉基因植株個體發育的起點是受精卵，形成該植株時無脫分化過程D將目的基因導入葉綠體DNA中，可避免目的基因通過花粉傳遞而造成“基因污染” 答案B13.基因工程技術也稱為DNA重組技術，其實施必須具備的四個必要條件是A

7、.目的基因 限制性內切酶 運載體 體細胞 B.重組DNA RNA聚合酶 限制性內切酶 連接酶C.工具酶 目的基因 運載體 受體細胞D.模板DNA 信使RNA 質粒 受體細胞答案C14在DNA 測序工作中，需要將某些限制性內切核酸酶的限制位點在 DNA上定位，使其成為 DNA 分子中的物理參照點。這項工作叫做“限制酶圖譜的構建”。假設有以下一項實驗：用限制酶 Hind，BamH和二者的混合物分別降解一個 4kb（1kb即1千個堿基對）大小的線性DNA 分子，降解產物分別進行凝膠電泳，在電場的作用下，降解產物分開，如下圖所示。據此分析，這兩種限制性內切核酸酶在該DNA 分子上的限制位點數目是以下哪

8、一組？AHind1個，BamH2 個 BHind2個，BamH3個CHind2個，BamH1 個 DHind和BamH各有2 個15下列有關“基因探針”的敘述，不正確的是 A基因探針的工作原理是堿基互補配對B待測的DNA分子首先要解旋變為單鏈，才可用基因探針測序C待測的DNA分子可以直接用基因探針測序 D基因探針技術可用于疾病診斷和環境監測答案C16細菌抗藥性基因存在于 A核區的DNA B RNA C質粒 D小的直線型DNA答案C17在PCR擴增前，需要將下列哪些物質加入微量離心管中？（ ）模板DNA 模板RNA DNA解旋酶 耐高溫的DNA聚合酶 引物 PCR緩沖液 脫氧核苷酸貯備液 核苷酸

9、貯備液ABCD答案A18人的糖蛋白必須經內質網和高爾基體加工合成。通過轉基因技術，可以使人的糖蛋白基因得以表達的受體細胞是A大腸桿菌 B酵母菌 CT4噬菌體 D質粒DNA答案B19質粒是基因工程最常用的運載體，它的主要特點是： ( )能自主復制不能自主復制結構很小蛋白質環狀RNA環狀DNA能“友好”地“借居”AB CD答案C20.水母發光蛋白由236個氨基酸構成，其中Asp.Gly.Ser構成發光環，現已將這種蛋白質的基因作為生物轉基因的標記，在轉基因技術中，這種蛋白質的作用是( )A.促使目的基因導入宿主細胞中 B.促使目的基因在宿主細胞中復制C.使目的基因容易被檢測出來 D.使目的基因容易

10、成功表達答案：C21限制性內切酶能識別特定的DNA序列并進行剪切，不同的限制性內切酶可以對不同的核酸序列進行剪切。現以3種不同的限制性內切酶對6.2kb大小的線狀DNA進行剪切后。用凝膠電泳分離各核酸片段，實驗結果如圖所示。請問：3種不同的限制性內切酶在此DNA片段上相應切點的位置是 答案：D22下圖是將人的生長激素基因導入細菌D細胞內，產生“工程菌”的示意圖。所用的載體為質粒A。若已知細菌D細胞內不含質粒A，也不含質粒A上的基因，質粒A導入細菌后，其上的基因能得到表達。能表明目的基因已與載體結合，并被導入受體細胞的結果是()A在含氨芐青霉素的培養基和含四環素的培養基上均能生長繁殖的細菌B在含

11、氨芐青霉素的培養基和含四環素的培養基上都不能生長繁殖的細菌C在含氨芐青霉素的培養基上能生長繁殖，但在含四環素的培養基上不能生長繁殖的細菌D在含氨芐青霉素的培養基上不能生長繁殖，但在含四環素的培養基上能生長繁殖的細菌答案：C23(2011天津寶坻一模)下列有關基因工程的敘述，錯誤的是()A從基因組文庫中獲取的某種生物的部分基因，可以實現物種間的基因交流B從cDNA文庫中獲取的目的基因，既無啟動子，又無內含子C用人的胰高血糖素基因制成的DNA探針，檢測人胰島B細胞中的mRNA，可形成雜交分子D基因表達載體中的標記基因。不能含有限制酶的切割位點答案：C24(2011北京東城示范校聯考二)降鈣素是一種

12、多肽類激素，臨床上用于治療骨質疏松癥等。人的降鈣素活性很低，半衰期較短。某科學機構為了研發一種活性高、半衰期長的新型降鈣素，從預期新型降鈣素的功能出發，推測相應的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條72個堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過18個堿基對形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補平，獲得雙鏈DNA，過程如下圖：獲得的雙鏈DNA經EcoR (識別序列和切割位 點GAATTC)和BamH (識別序列和切割位 點GGATCC)雙酶切后插入大腸桿菌質粒中。下列有關分析錯誤的是()AKlenow酶是一種DNA聚合酶B合成的雙鏈DNA有72個堿基對CEcoR 和BamH 雙酶切的目的是保證目的基因和

13、運載體的定向連接D篩選重組質粒需要大腸桿菌質粒中含有標記基因答案：B25.利用生物工程改造生物特性，從而生產人類所需的產品。下列關于生物工程的相關知識，敘述正確的是 若要生產轉基因抗病水稻，可將目的基因先導入到大腸桿菌中，再轉入水稻細胞中植物體細胞雜交，能克服遠緣雜交不親和的障礙，培育出的新品種一定不是單倍體基因治療主要是對具有缺陷的體細胞進行全面修復利用基因突變原理培育成生產人干擾素的酵母菌利用基因工程手段培育成生產人胰島素的大腸桿菌利用細胞工程技術培育成生產單克隆抗體的細胞系A. B. C. D. 答案：B26.下列關于生物工程中常見的幾種酶的敘述，正確的是 ADNA連接酶可把目的基因與載

14、體的黏性末端的堿基黏合，形成重組DNAB限制性核酸內切酶將一個DNA分子片段切成兩個片段需消耗兩個水分子CTaq酶是用PCR儀對DNA分子擴增過程中常用的一種耐高溫的DNA連接酶D纖維素酶和果膠酶處理植物細胞獲得原生質體，便于植物雜交育種答案：B二、簡答題1下圖為一種限制酶切割DNA分子示意圖。請回答問題：(1)這種限制酶的切點是_，形成_個_末端，該末端的特點是 。(2)從題干中可知限制性核酸內切酶識別序列的特點是 (3)如果G發生突變，可能發生 。答案：(1)G和A之間2黏性堿基序列互補(2)只能識別某種特定的核苷酸序列(3)限制酶不能識別切割位點2科學家通過基因工程培育抗蟲棉時，需要從蘇

15、云金芽孢桿菌中提取出抗蟲基因，“放入”棉花的細胞中與棉花的DNA結合起來并發揮作用，請回答下列有關問題：（1）從蘇云金芽孢桿菌中切割抗蟲基因所用的工具是_ _，此工具主要存在于_中，其特點是_ _。（2）蘇云金芽孢桿菌一個DNA分子上有許多基因，獲得抗蟲基因常采用的方法是“鳥槍法”。具體做法是：用_酶將蘇云金芽孢桿菌的_切成許多片段，然后將這些片段_ _，再通過_轉入不同的受體細胞，讓它們在各個受體細胞中大量_，從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法把_分離出來。（3）進行基因操作一般要經過的四個步驟是_、_、_、_。2（1）限制酶 微生物 一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定

16、的位點切割（2）限制性內切 DNA 分別與運載體結合 運載體 復制 帶有目的基因的DNA片段（3）提取目的基因 目的基因與運載體結合 將目的基因導入受體細胞 目的基因的檢測和表達3.根據實驗原理和材料用具，設計實驗確定細菌質粒的抗菌素基因所控制的抗菌素的類別。實驗原理：作為運載體的質粒，需要有標記基因，這一標記基因是抗菌素抗性基因。有抗性基因的質粒可用作運載體。材料用具：青霉素、四環素各10萬單位溶液，菌種試管，滅菌的含細菌培養基的培養皿，酒精燈，接種環，一次性注射器，無菌水，恒溫箱方法步驟：第一步：取3個含培養基的培養皿，分別編號為1、2、3號，用三支注射器分別向3個培養基中注入1ml無菌水

17、，青霉素液、四環素液，并使之均勻分布之整個培養基表面。第二步： 。第三步： 。結果預期： 。答案：第二步：將接種環在酒精燈上灼燒，在酒精燈旁用接種環挑取等量菌種，分別培養在三個不同的培養基上，置于恒溫箱內，培養一段時間。第三步：將接種后的培養基放在37的恒溫箱中培養24小時。預期結果：1號培養基內細菌正常生長，2、3號內的細菌死亡，說明細菌無抗青霉素基因，無抗四環素基因；1、2號培養基內細菌正常生長，3號培養基內細菌死亡，說明細菌有抗青霉素基因，無抗四環素基因；1、3號培養基內細菌正常生長，2號培養基內細菌死亡，說明細菌質粒無抗青霉素基因，有抗四環素基因；1、2、3號培養基內細菌都正常生長，說

18、明細菌質粒既有抗青霉素基因，又有抗四環素基因。4.下圖為培育轉基因小鼠的部分過程示意圖。請回答下列問題：外源基因A細胞移植10-30個細胞到假孕母體內的輸卵管中斷尾分離DNA檢測外源基因（1）若需在短時間內獲得較多的外源基因，通常采用 技術。（2）圖中的A細胞通常為 細胞，將外源基因導入該細胞常用的方法是 。（3）仔鼠出生后可用其尾巴進行DNA檢測，通過 方法，檢測出攜帶外源基因的小鼠。至于外源基因是否合成相應的蛋白質，可從轉基因小鼠中提取蛋白質，并用相應的抗體進行 雜交，若有雜交帶出現，則表明小鼠體內的外源基因 。（4）在外源基因導入小鼠的A細胞時，外源基因可能隨機地插入到該細胞的DNA中。

19、這些細胞有的能發育成轉基因小鼠，有的卻死亡。請分析外源基因插入后導致有些A細胞死亡的最可能原因 。（1）PCR （2）受精卵 顯微注射法 （3）DNA分子雜交 抗原抗體 已表達 （4）外源基因的插入使受精卵內生命活動必需的某些基因不能正常表達（2分）5.大腸桿菌與人類的生產生活密切相關。據圖表回答下列有關問題：圖：利用lacZ基因失活篩選重組質粒示意圖（1）科研人員用放射線處理某大腸桿菌獲得兩個突變株A和B，然后對A和B進行實驗，結果如上表。突變株A不能在一般培養基上生長的直接原因是_。將突變株A和B混合在一起接種于一般培養基中，卻能正常生長的最可能原因是_。（2）根據上表可知，營養物質甲、乙

20、對突變株A、B來說屬于 （成分）（3）如圖是利用lacZ基因的插入失活篩選重組質粒示意圖。大腸桿菌pUC118質粒的某限制酶唯一酶切序列位于該質粒的lacZ基因中。若lacZ基因完整，便可表達出b-半乳糖苷酶，并能將培養基中含有的IPTG和X-gal水解成藍色，形成藍色菌落；若lacZ基因中插入了外源基因，帶有pUC118質粒的大腸桿菌便不能表達b-半乳糖苷酶，將形成白色菌落；pUC118還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。據此可知，作為受體的大腸桿菌應 ，以便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。圖中獲取人體基因時所用到的酶是 。試管中必需加入的酶是 。取用氯化鈣溶液處理（增加其細胞壁的通透性）過的受體

21、大腸桿菌，置于試管中，并加入 。（4）圖中的選擇培養基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還應加入_ _等物質，用以篩選導入了重組質粒的受體大腸桿菌。（5）將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養基上培養，以檢測受體大腸桿菌是否導入重組質粒，請預測菌落的顏色，并分析結果： 。 。【答案】（1）突變株A中缺乏合成營養物質甲所需要的酶使甲不能合成 B可以提供A生長需要營養物質甲，A可以提供B生長需要的營養物質乙 （2）生長因子 （3）不含氨芐青霉素抗性基因（或對氨芐青霉素敏感） 限制酶 DNA連接酶 在試管中制備好的DNA （4）IPTG和X-gal、氨芐青霉素 （

22、5）如果長出藍色菌落，說明自連的運載體pUC118質粒已轉入受體菌，但目的基因沒有接入運載體（或說明重組質粒沒導入受體大腸桿菌） 如果長出白色菌落，說明重組質粒已導入受體大腸桿菌6下圖表示利用基因工程培育抗蟲棉的過程，請據圖回答下列有關問題：（1）若限制酶的識別序列和切點是GATC，限制酶的識別下列和切點是GGATCC，那么在過程中，應用限制酶 切割質粒，用限制酶 切割抗蟲基因。過程在 （體內/體外）進行。（2）將通過過程得到的大腸桿菌涂布在含有 的培養基上，能夠生長說明已導入了普通質粒或重組質粒，反之則說明沒有導入，該培養基從功能方面屬于 培養基。（3）重組質粒導入大腸桿菌的目的是 。（4）

23、經篩選分析，該植株細胞中含有一個攜帶抗蟲基因的DNA片段，因此可以把它看作是雜合子。理論上，該轉基因植株自交產生的F1代中，仍具有抗蟲特性的植株占總數的 。（5）過程所用技術稱為 ，從遺傳學角度來看，根本原因是根細胞具有 。6（1） （和） 體外 （2）四環素 選擇 （3）大量復制目的基因（抗蟲基因）（4）3/4 （5）植物組織培養 發育成完整個體的全部遺傳物質7.抗旱植物體內的抗旱基因為R，旱敏基因為r。研究表明，多數抗旱性農作物能通過細胞代謝，產生一種代謝產物，調節根部細胞內的滲透壓，此代謝產物在葉肉細胞內很難找到。（1）抗旱性農作物的葉肉細胞內難以找到與抗旱有關的代謝產物的原因是 。（2

24、）現已制備足夠多的R探針和r探針，通過探針來檢測某植物相關的基因型。請據圖分析回答：某植物總DNAA B C擴增處理R或r基因單鏈DNA轉移到濾膜上與濾膜上的探針進行DNA分子雜交R探針r探針在濾膜上形成的雜交斑圖中擴增基因常用的方法是 。若已提取到某抗旱植物Rr的葉肉細胞總DNA， （能或不能）以DNA為模板直接擴增抗旱基因，擴增過程中尋找抗旱基因的位置依靠 。圖中處理基因獲取單鏈DNA常用的方法有 。濾膜上DNA分子雜交發生在 兩者之間。若被檢植物只發生A現象，則被檢植物的基因型為 。7.（1）基因選擇性表達 （2）PCR技術 能 引物 解旋酶處理或加熱 探針與R或r基因 RR 8.為實現

25、目的基因與載體結合，以便在大腸桿菌中大量表達相應的蛋白質，研究人員進行了如圖所示操作。請分析回答下列問題： （1）將_同時用BamH I切割并混合，加入_進行連接，再與大腸桿菌感受態細胞混合，最后，將混合物接種在含有_的平板培養基上。（2）切割后的載體用堿性磷酸酶處理，除去末端的5磷酸，可防止載體自我連接，目的基因片段不用堿性磷酸酶處理，仍然能與用堿性磷酸酶處理過的載體連接。在5組平板培養基上接種了不同操作的大腸桿菌感受態細胞，如下表所示。組別平板培養基上接種的大腸桿菌感受態細胞結果（菌落數）1未進行操作（只接種大腸桿菌感受態細胞）02導入未切割的載體10003導入切割并連接的載體4354導入

26、切割后用堿性磷酸酶處理并連接的載體255導入切割后用堿性磷酸酶處理，并與目的基因連接的載體34 第1組實驗目的是確認_是否符合實驗要求。第2組平板培養基菌落數目最大，說明大腸桿菌感受態細胞能夠_。第3組實驗用來檢驗_酶是否具有活性。第4組實驗用來檢驗_酶是否具有活性。實驗中用堿性磷酸酶處理載體可以降低僅有載體的菌落數，增加攜帶_ _的菌落比例。8.（1）含目的基因的DNA與載體（或質粒）（2分） DNA連接酶（1分） 氨芐青霉素（2分）（2）大腸桿菌感受態細胞和平板培養基（2分） 攝取載體（或質粒、外源DNA）（2分） DNA連接酶和限制（2分） 堿性磷酸（2分） 重組質粒（或重組DNA）（2

27、分）9.圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列。現有Msp I、BzmH I、Mbo I、Sma I4種限制性核酸內切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請回答下列問題 (1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由 連接。(2)若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是 末端，其產物長度為 。(3)若圖1中虛線方框內的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變為基因d。從雜合子中分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產物中共有 種不同

28、長度的DNA片段。(4)若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是 。在導人重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加 的培養基進行培養。經檢測，部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是 。9答案（1）脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖（2）平 537bp、790bp、661bp（3）4 （4）BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質粒反向鏈接10將動物致病菌的抗原基因導入馬鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉基因馬鈴薯可使動物獲得免疫力。以下是與植物疫苗制備過程相關的圖和表。請根據以上圖

29、表回答下列問題。（1）在采用常規PCR方法擴增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內的DNA聚合酶，其最主要的特點是 。（2）PCR過程中退火（復性）溫度必須根據引物的堿基數量和種類來設定。表1為根據模板設計的兩對引物序列，圖2為引物對與模板結合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？_。（3）圖1步驟所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？ 。（4）為將外源基因轉入馬鈴薯，圖1步驟轉基因所用的細菌B通常為 。（5）對符合設計要求的重組質粒T進行酶切，。假設所用的酶均可將識別位點完全切開，請根據圖1中標示的酶切位點和表2所列的識別序列，對以下酶切結

30、果作出判斷。采用EcoR和Pst酶切，得到_種DNA片斷。采用EcoR和Sma酶切，得到_種DNA片斷。10答案：（1）耐高溫 2）引物對B （3）否 （4）農桿菌 （5）2 111如圖所示，若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對堿基)上相應的EF區域 (0.2kb)，形成重組質粒pZHZ2。（1）所形成的重組質粒pZHZ2_。A既能被E也能被F切開 B能被E但不能被F切開C既不能被E也不能被F切開 D能被F但不能被E切開（2）已知在質粒pZHZl中，限制酶G切割位點距限制酶E切割位點08kb，限制酶H切

31、割位點距限制酶F切割位點O5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質粒pZHZ2樣 品，據表4所列酶切結果判斷目的基因的大小為 kb；并將目的基因內部的限制酶G和H切割位點標注在圖19中。（3）若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達產物，則需將重組質粒pZHZ2導入至山羊的_細胞中。若pZHZ2進入細胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉基因純合子山羊的方式是_ _。（4）上述目的基因模板鏈中的。TGA序列對應一個密碼子，翻譯時識別該密碼子的tRNA上相應的堿基序列是_。一般而言，一個核糖體可同時容納_分子的tRNA。（5）下列四幅圖中能正確反映目的基因轉錄產物內部結構的是_。TSS：轉錄

32、起始位點，TTS：轉錄終止位點，STC：起始密碼子，SPC：終止密碼子【答案】（1）A（2）1.2 見右圖 （3）受精卵 轉基因山羊間相互交配 （4）UGA 2（或3） （5）B中（3端加上一個50200個的多聚腺苷酸序列，即 polyA尾，在5端加上一個7-甲基鳥苷三 磷酸的“帽”結構）12.請回答基因工程方面的有關問題：（1）利用PCR技術擴增目的基本因，其原理與細胞內DNA復制類似（如下圖所示）。圖中引物中為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎。從理論上推測，第四輪循環產物中含有引物A的DNA片段所占比例為 。在第 輪循環產物中開始出現兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。（2）設計引物是

33、PCR技術關鍵步驟之一。某同學設計的兩組引物（只標注了部分堿基序列）都不合理（如上圖），請分別說明理由。第一組： ； 。（3）PCR反應體系中含有熱穩定DNA聚合酶，下面的表達式不能反映DNA聚合酶的功能，這是因為_ 。（4）用限制酶EcoRV、MboI單獨或聯合切割同一種質粒，得到DNA片段長度如下圖（1kb即1000個堿基對），請在答題卡的指定位置畫出質粒上EcoRV、MboI的切割位點。12. （1）15/16 三 （2）引物I和引物II局部發生堿基互補配對而失效 引物I自身折疊后會出現局部堿基互補配對而失效 （3）DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸連續結合到雙鏈DNA片段的引物鏈上 （4

34、）見右圖13重疊延伸PCR技術是一種通過寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，通過多次PCR擴增，從而獲得目的基因的方法。該技術在擴增較長片段的DNA、不同來源的DNA片段拼接、基因的定點誘變等方面具有廣泛的應用前景。右圖是利用重疊延伸PCR技術擴增某目的基因的過程。其主要設計思路是用具有互補配對片段的引物(圖中引物2、引物3)，分別PCR，獲得有重疊鏈的兩種叫A片段，再在隨后的擴增反應中通過重疊鏈的延伸獲得目的基因。結合所學知識，分析下列問題：(1)引物中G+C的含量影響著引物與模板DNA結合的穩定性，引物中G+C的含量越高，結合穩定性 。(2)在第一階段獲得兩種具有重疊片段DNA的

35、過程中，必須將引物1、2和引物3、4置于不同反應系統中，這是因為 。(3)引物1、引物2組成的反應系統和引物3、引物4組成的反應系統中均進行一次復制，共產生 種雙鏈DNA分子。(4)在引物1、引物2組成的反應系統中，經第一階段形成圖示雙鏈DNA至少要經過 次復制。(5)若利用微生物擴增該目的基因，其基本步驟包括： 、 、微生物的篩選和培養、從菌群中獲取目的基因。14.下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圈l、圈2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題： （1）一個圖1所示的質粒分子經Sma 切割前后，分別含有 個游離的磷酸基團。 （2）若對圖中質粒進行改造，插入的Sma酶切位點

36、越多，質粒的熱穩定性越 。 （3）用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用Srna 切割，原因是 。 （4）與只使用EcoR I相比較，使用BamH 和Hind 兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA的優點在于可以防止 。 （5）為了獲取重組質粒，將切割后的質粒與目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重組質粒中抗生素抗性基因的作用是為了 。 （7）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉運蛋白基因，將重組質粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在 的培養基中培養，以完成目的基因表達的初步檢測。14【答案】（1）0、2（2）高（3）Sma會破壞質粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因（4）質粒和

37、含目的基因的外源DNA片段自身環化（5）DNA連接（6）鑒別和篩選含有目的基因的細胞 （7）蔗糖為唯一含碳營養物質15.蘇云金桿菌(Bt)能產生具有殺蟲能力的毒素蛋白。下圖是轉Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖(為抗氨芐青霉素基因)，據圖回答下列問題。 (1)將圖中的DNA用HindIII、BamH I完全酶切后，反應管中有 種DNA片段。 (2)圖中表示HindIII與BamH I酶切、DNA連接酶連接的過程，此過程可獲得 種重組質粒；如果換用Bst l與BamH l酶切，目的基因與質粒連接后可獲得 種重組質粒。 (3)目的基因插入質粒后，不能影響質粒的 。 (4)圖中的Ti質粒調控合成的

38、vir蛋白，可以協助帶有目的基因的TDNA導入植物細胞，并防止植物細胞中 對TDNA的降解。 (5)已知轉基因植物中毒素蛋白只結合某些昆蟲腸上皮細胞表面的特異受體，使細胞膜穿孔，腸細胞裂解，昆蟲死亡。而該毒素蛋白對人類的風險相對較小，原因是人類腸上皮細胞 。 (6)生產上常將上述轉基因作物與非轉基因作物混合播種，其目的是降低害蟲種群中的 基因頻率的增長速率。15(1)4 (2)2 1 (3)復制 (4)DNA水解酶 (5)表面無相應的特異性受體(6)抗性16下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點，圖1中Cmlr表示氯霉素抗性基因，Ner表示新霉素抗

39、性基因。請回答下列問題：(1)將提取的質粒與外源DNA分別加入緩沖液中，選用相應的限制酶處理時，影響處理效果的外界因素主要是 等(寫出兩點)。(2)用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒時，能否使用MspI與BamHI同時切割質粒與外源DNA?答： ，原因是 。(3)可選用 (兩種)限制酶同時酶切質粒與外源DNA，酶切并連接后可獲得 種含目的基因的重組質粒，篩選含有該重組質粒的大腸桿菌時，需要在含 的培養基上培養。(4)研究發現當CCGG序列在X酶作用下，其內部胞嘧啶殘基發生變化后，MspI仍能識別并切割，但Hpa則不能識別，而BamHI和SmaI對類似變化也十分敏感，KpnI則不敏感。若在含有

40、圖1所示質粒和X酶的緩沖液中，同時加入KpnI、Hpa、MspI和SmaI并完全酶切后，則最可能得到 種DNA序列。(5)為了從基因文庫中分離獲取T1噬菌體抗性基因，將重組質粒導入對T1噬菌體敏感的大腸桿菌，然后將含有該大腸桿菌的菌液分別接種在預先涂有 的培養基上培養，從而初步檢測目的基因的表達。16(1)溫度、pH (2)不能(1分) MspI會切割破壞質粒上的兩個標記基因(1分)，而BamHI會切割破壞目的基因(1分) (3)KpnI、Smal 2 新霉素 (4) 4 (5)Tl，噬菌體1718右圖為某種質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性核酸內切酶EcoR、BamH的酶切位點，amp

41、R為青霉素抗性基因，tctR為四環素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoR、BamH在內的多種酶的酶切位點。據圖回答：(1)將含有目的基因的DNA與質粒表達載體分別用EcoR酶切，酶切產物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產物有_、_、_三種。若要從這些連接產物中分離出重組質粒，需要對這些連接產物進行_。(2)用上述3種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉化實驗。之后將這些宿主細胞接種到含四環素的培養基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是_；若接種到含青霉素的培養基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是_。(3)目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結合的位點是_，其合成的產物是_。(4)在上述實驗中，為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的末端發生任意連接，酶切時應選用的酶是_。答案：(1