1、1會計學單基因遺傳病的研究方法與技術單基因遺傳病的研究方法與技術基因突變基因突變基因突變基因突變：傳遞中不改變原有的突變。：傳遞中不改變原有的突變。：傳遞中不斷改變自己，多見：傳遞中不斷改變自己，多見于短重復序列的突變，在一代代傳遞中于短重復序列的突變，在一代代傳遞中重復次數發生明顯變化。重復次數發生明顯變化。 三核苷酸重復突變三核苷酸重復突變基因突變類型基因突變類型：只有一個或幾個核苷酸的改變，是突變：只有一個或幾個核苷酸的改變，是突變中最多見的形式。突變的結果分為：中最多見的形式。突變的結果分為：基因突變類型基因突變類型各種類型病理性突變的比例各種類型病理性突變的比例微小突變微小突變基因突

2、變分析所用實驗材料基因突變分析所用實驗材料Xq27.3前突變和全突變前突變和全突變正常正常 CGG 200F: Fully expanded and methylatedNM: Methylated X do not cut with EclXIP: Unmethylated premutationN: X in normal male and active normal femalev聚合酶鏈式反應于聚合酶鏈式反應于1983年由美國年由美國Cetus公司的公司的K.Mullis建立，并和建立，并和定點突變的發明者定點突變的發明者M.Smith一起榮獲一起榮獲1993年度諾貝爾化學獎，年度諾貝

3、爾化學獎，為為生命科學領域的研究開創了嶄新時代。生命科學領域的研究開創了嶄新時代。PCR反應原理和反應過程反應原理和反應過程5533d.NTPs耐熱DNA聚合酶引物5353535353535353添加反應混合液添加反應混合液及樣本及樣本變性變性535353535353退火退火加入試管中加入試管中延伸延伸53535353繼續延伸繼續延伸535355TaqTaq353TaqTaq55循環循環5353535355335353第二個循環第二個循環4個拷貝個拷貝第三個循環第三個循環8個拷貝個拷貝53535353535353535353533553535353第第n個循環個循環2n個拷貝個拷貝應用應用PC

4、R相關技術進行基因突變相關技術進行基因突變分析的策略與方法分析的策略與方法策略與方法策略與方法1. 脊髓小腦性共濟失調脊髓小腦性共濟失調 NC F1 F2 F3 F4 F5 PC M應用應用PCR技術分析一遺傳性脊髓小腦性共技術分析一遺傳性脊髓小腦性共濟失調（濟失調（SCA)3型家系型家系NCNC: :正常對照正常對照PCPC: :陽性對照陽性對照F F: :家系成員家系成員M M:Marker:Marker結果：結果：家系成員家系成員1 1、3 3、4 4有有SCA3SCA3致病基因突變致病基因突變; ;家系成員家系成員2 2、5 5未檢測未檢測到突變到突變123452. 脊肌萎縮癥脊肌萎縮

5、癥應用應用PCR-RFLP技術分析脊肌萎縮癥（技術分析脊肌萎縮癥（SMA）致病基因致病基因SMNPCRPCR擴增擴增SMNSMN基因基因exon7,DraIexon7,DraI酶切酶切PCRPCR產物產物. .酶切酶切N N：正常人：正常人PCRPCR產物被酶切為產物被酶切為兩條帶兩條帶酶切酶切P P：陽性對照：陽性對照PCRPCR產物被酶切為產物被酶切為一條短帶一條短帶病人病人1 1：結果顯示：結果顯示SMNSMN基因有突變基因有突變病人病人2 2和和3 3：結果：結果顯示未有突變顯示未有突變4. 假肥大型肌營養不良癥假肥大型肌營養不良癥MLPA 技術原理技術原理MLPA方法檢測方法檢測DM

6、D 1 12 23 34 45 5464749新致病基因的研究方法新致病基因的研究方法和技術和技術StopCACACAPrimer 1Primer 2CACACACACACACACACACACACACACACAD4S1534D4S2929D4S2460D4S423I-1114,124176,178200,202105,112II-1114,120153,159200,202107,109II-2114,124157,176202,204105,112II-3114,122157,178200,202102,105II-4114,124157,176202,204105,112II-5114,1

7、24157,176198,202107,109III-1114,124153,176200,202109,112III-2114,124176,176202,202109,112 隱性突變隱性突變往往導致失去功能（loss of function） 顯性突變可導致獲得功能（gain of function）和失去功能 失去功能：單倍劑量不足（halpoinsufficency） 獲得功能：顯性負效應（dominant negtive） 基因突變對基因功能的影響及發病基因突變對基因功能的影響及發病機制研究機制研究將目的DN片段克隆到質粒載體 失去功能引起單倍劑量不足失去功能引起單倍劑量不足， 獲得功能導致顯性負效應獲得功能導致顯性負效應，適于建立轉基因動物模