1、 中國藥科大學 平其能由磷脂及膽固醇等組成具有雙分子層結構的微小泡囊(vesicles); 單層脂質體（單層脂質體（suv） 20100nm大單層脂質體（大單層脂質體（luv） 100nm1000nm多層脂質體（多層脂質體（mlv） 15um 美國美國fda批準的脂質體產品批準的脂質體產品doxil 阿霉素阿霉素1995daunoxome 阿霉素阿霉素1996ambisome兩性霉素兩性霉素 b1997depocyt阿糖胞苷阿糖胞苷1999美國美國fda批準的脂質復合物產品批準的脂質復合物產品ambelcet兩性霉素兩性霉素 b 1995amphotec兩性霉素兩性霉素 b 1997國內研究的

2、脂質體l紫杉醇l硫酸長春新胺l羥基喜樹堿l硝基喜樹堿l鹽酸拓撲替康l燈盞花素l環孢素l反維a酸天然卵磷脂合成磷脂 peg-磷脂c-o-ch2-ch-ch2-o-p-o-ch2-ch2-n-ch3ch3ch3ooc-oooho-o-ch2-ch2n-o-ch2-ch2n-o-ch2-ch2n-ohlong circulation liposome; stealth liposome長循環脂質體（隱形脂質體、空間立體脂質體）peg-磷脂修飾脂質體實現長循環原理l1、制備技術 l 薄膜超聲法l 逆相蒸發法l 乙醇注入法l 化學梯度法（ ph梯度法、硫酸銨梯 度法、醋酸銨梯度法）l 凍融法l 前體脂質

3、體法l 高壓均質、擠出技術高壓均質、擠出技術 脂質氯仿溶液脂質氯仿溶液 （脂溶性藥物）（脂溶性藥物） 旋轉蒸發和真空干燥旋轉蒸發和真空干燥 水合（水溶性藥物）水合（水溶性藥物） 多室脂質體多室脂質體 (mlvs) 超聲超聲 擠出擠出 小單室脂質體（小單室脂質體（suv）（1）薄膜蒸發法 脂質氯仿溶液脂質氯仿溶液/水溶液水溶液 （藥物）（藥物） 旋轉蒸發和真空干燥旋轉蒸發和真空干燥 膠態膠態 水合（藥物）水合（藥物） 超聲超聲 擠出擠出 小單室脂質體（小單室脂質體（suv）（2）逆相蒸發法 脂質氯仿溶液脂質氯仿溶液 旋轉蒸發和真空干燥旋轉蒸發和真空干燥 干膜干膜 水合（硫酸銨）水合（硫酸銨） 擠

4、出擠出 空白脂質體（空白脂質體（nacl透析，調整透析，調整ph，解離藥物），解離藥物） 含藥脂質體含藥脂質體（4）空白脂質體及化學梯度法 對水溶性弱酸或弱堿性藥物實現高效包封； ph梯度法：調節酸堿度使內水相藥物以離子型、外水相藥 物以分子型存在，外水相ph3.7 硫酸銨梯度法：弱堿性藥物 (pnh3= 0.13 cm.s-1, pso4= 0.01 cm.s-1) 醋酸根梯度法：弱酸性藥物 (pac- = 6.6 x 10-4 cm.s-1, pca+ 2.5 x 10-11 cm.s-1)l 金屬離子梯度法：mn硫酸銨梯度主動載藥硫酸銨梯度法對弱堿性藥物的包封效率高nh（nh4）2so4

5、 2nh4+ + so4=2h+ +2nh3r2r-so4=+r2so4影響梯度法載藥效率的因素l1、化學梯度l2、包封溫度l3、脂質類型l4、藥脂比l5、載藥介質l6、載藥工藝硫酸銨濃度的影響l在一定濃度范圍內，包封率與硫酸銨濃度的增加而增加，當濃度高于0.35m后包封率反而有所下降溫度的影響l因為脂膜在相轉變溫度時的流動性變大，使得藥物易于穿透脂膜，加熱供給了藥物跨越脂膜足夠的活化能，使得跨膜反應快速完成如左圖為拓撲替康在20，40，60時的載藥量與時間的關系曲線形成工藝的影響l超濾: 超濾膜能截流脂質體能將外水相小分子如硫酸銨等物快速除去，是工業化生產梯度形成的常用工藝。l葡聚糖層析：根

6、據分子大小洗脫過程中將膠體系統的脂質體與分子系統的硫酸銨快速分離?？赡茉斐芍|體懸液的稀釋，需要提高脂質與藥物比例時受到限制l透析：用足夠體積（通常總體積至少應為樣品體積的100倍）的透析介質通過透析過程，交換脂質體的外水相。耗時，透析過程部分脂質體破壞l磷脂與膽固醇比例影響相變溫度l載藥介質影響膜的性質（5）乙醇注入法l將藥物溶于磷脂的乙醇有機相溶液中，水相中含防腐劑、絡合劑、電解質等。從管道注入有機溶液，通過高速均質機將有機溶液與水相混合。l混合速度可達1500-20000rpm，注入壓力為0.1-1000bar, 流速從0.1ml/min至1000ml/min,依批量而定。l水相溶液的流

7、速是有機溶液的至少50倍；l注入過程中保證溶液的充氮以避免磷脂的氧化。 乙醇注入法生產脂質體基本裝備l1 1、微量有機溶劑的驅除l建議應用無毒或低毒有機溶劑如乙醇、聚乙二醇、乙醚等，并考慮其用量、純度、溶解度、殘留限度等。溶劑可以從通過揮干、透析等手段去除。l乙醇的優點是安全，缺點是不易清除，引起脂質雙層結構不穩定；l批量越小、溫度越高的蒸發越有效地逐除溶劑。批量大小的影響比溫度的影響更明顯。 抗氧化：磷脂結構中不飽和雙鍵容易在有氧條件下氧化，因此在操作過程中應填充氮氣、避光操作及包裝、在處方中加入ve或bht，edta等。l除熱原或內毒素：一般可過濾可去除熱原，濾膜表面可以吸附內毒素，但脂質

8、材料也可能攜帶微生物透過濾膜。l選用純度高、無熱原污染的磷脂更為重要，在生產過程中均應保證無菌環境，移除游離藥物 必須移除未包封進入脂質體的游離藥物，可以采用凝膠柱分離或超濾，后者特別適合分離未包封的水溶性藥物。4、控制粒子大小、控制粒子大小 一般采用擠出或高壓均質法；例如微流化機microfluidizer (microfluidics corp.)，均質室需用冰浴冷卻以降低均質產生的熱。滅菌 脂質體不能耐受熱壓滅菌及幅射滅菌，小于150nm的脂質體可以適合于過濾除菌，但更大的粒子只能用無菌操作，最好的方案是除菌過濾結合全程的100級的無菌操作環境。但從生產實際及成本上考慮有較大困難。6、高

9、壓均質設備（1）lavestin(avestin inc., canada)高壓均質設備（2）microfluidizer (microfluidics corp.，usa)1、載藥量：藥脂比2、包封率：制備效率或脂質體/溶液藥量比3、滲漏率：貯存后或應用前包封率下降量；4、粒子大小和均勻度：5、穩定性：氧化磷脂、聚結6、靶向性：相對靶向率、靶向效率二、二、羥喜樹堿脂質體的研究的研究目前臨床上羥喜樹堿注射液主要用于治療肝癌、消化系統惡性腫瘤、膀胱癌、肺癌、粒細胞性白血病、癌性腹水等。對期晚期腫瘤耐藥患者（包括鼻咽癌肝轉移、胃癌胰腺轉移、肝癌骨轉移及卵巢癌全身廣泛轉移等），對晚期耐藥性惡性腫瘤有

10、一定的治療作用。 羥喜樹堿e環上的-羥基內酯環是活性的必需基團。羥喜樹堿不溶于水，一般用其鈉鹽水溶液作為臨床制劑，但形成鈉鹽是使其e環上的-羥基內酯環打開，打開后形成的藥物羧酸鹽形式表現出極低的抗拓撲異構酶活性。lactone form carboxylate form the structure of hydroxycamptothecinl 將羥喜樹堿及9-硝基喜樹堿制備成脂質體，不會使-羥基內酯環開環，并且因其分子嵌入雙層磷脂膜中，可以避免-羥基內酯環在水環境和血液中開環，從而保持它的生物活性；l采用脂質體劑型可以利用脂質體本身的性質，改變羥喜樹堿的體內分布，使其具有組織靶向性。羥喜樹堿

11、脂質體外觀為圓整的球粒，在圖中可清晰的看到一圈圈指紋狀的磷脂雙分子層。 相變溫度tm 不同藥脂比的羥喜樹堿脂質體(1:10、1:20、1:30) tm 隨著藥脂比提高而增加，當藥脂比達到1:30時，羥喜樹堿脂質體的tm達44.1，從而使得其進入體內后不會因為溫度的升高而出現突釋。 l羥喜樹堿在模擬生理ph環境下開環迅速，10min閉環率即降至84.53，4h下降至50%，4h8h趨于平衡。 l而羥喜樹堿脂質體在模擬生理ph環境下24h羥喜樹堿的閉環率仍大于90%。 l羥喜樹堿羧酸鹽在全血環境下因為ph變化的原因逐步閉環，閉環率隨時間有所增加，至22%左右達平衡；l羥喜樹堿內酯在全血環境下開環迅

12、速，10min閉環率即降至73.38，30min閉環率下降至50%，1h后趨于平衡，達30%左右；l而羥喜樹堿脂質體在全血環境下閉環率下降速度較慢，至12h羥喜樹堿的閉環率仍大于60%。 同等劑量的l-hpct靜脈注射給藥后血藥濃度顯著高于s-hcpt組，其中2、5、10、15、30、60、120min時分別為s-hcpt組的7.5、5.9、6.2、5.1、4.3、2.7、1.6倍，且可測得的血藥時間點多于s-hcpt組。parametersl-hcpts-hcptt1/2(min)11.013.23*3.521.97t1/2(min)290.35249.4999.6929.16k12(1/m

13、in)0.02880.0112*0.17360.1134k10(1/min)0.03570.01390.04790.0208vd0.02420.0087*0.07310.0325cl(l/kg/h)0.000810.00024*0.002960.00061auc(ng.h/ml)113804901*2934564note：compared to s-hcpt，* p0.05、 * p0.01、* p肝腸腎血肺心胃腦，腦中含量極低，接近檢測最低限量；與s-hcpt組比較，除腸中藥物含量相近無顯著性差異外，其各組織臟器均顯著增高(p0.05或p0.01），脾、血、心、肺、肝、腎、胃、腦組織中羥喜樹

14、堿含量分別是羥喜樹堿注射劑組的131.7、53.4、36.9、25.5、10.1、8.3、3.6和2.8倍。 靜注給藥后1hour，l-hcpt組以肝臟中藥物含量最高，余依次為腎、腸、脾、胃、肺，其它組織臟器中羥喜樹堿含量大多接近或低于檢測限。s-hcpt組腸組織中的藥物濃度與l-hcpt組相似，除肝、腎中有少數動物尚能測到外，其余均低于檢測限。 靜注給藥后3hour，l-hcpt組動物肝、腎、腸組織中藥物濃度為13.27、6.48和1.77g/g，肝、腸組織中藥物含量仍與給藥后1hour時相近，腎組織中藥物含量明顯降低。部分動物的脾、胃、肺組織中尚能測到低濃度的羥喜樹堿，余組織臟器及血中羥喜

15、樹堿藥物濃度已低于最低檢測限。s-hcpt組只在腸組織中尚有分布，藥物濃度為2.21g/g，與1hour時藥物含量相近。 l-hcpt靜脈注射給藥后，1hour和3hour主要的分布在肝、腎、腸中。3hour肝、腸組織中藥物含量仍與給藥后1hour時相近，腎組織中藥物含量明顯降低。s-hcpt與l-hcpt有相似的腸道分布特征，其它臟器的藥物濃度很快減少，低于最低檢測限。 l-hcpt具有較明顯的肝靶向性分布和緩釋作用，肝臟中的藥物濃度較普通制劑顯著增高，且作用持續時間顯著延長，具有更強的抗腫瘤活性的可能。 粒徑對羥喜樹堿脂質體在脾、肺中的分布有一定的影響。粗粒徑脂質體相對于其它粒徑的脂質體易

16、于被脾、肺的網狀內皮細胞吞噬，因而5分鐘時其在脾、肺中分布相對較多。immunological liposomedrug containing immunoliposomeno immunospecificbindingtargetcellnon-targetcellimmunoliposomes腫瘤細胞靶向腫瘤細胞靶向 結合 內化 高載藥量 結構穩定 長循環 無免疫原性 bystander killing+figure 7lysosomeendosomenucleus旁路效應可以應用的介導配基l抗體抗原：b-淋巴瘤細胞和細胞內抗原決定簇（cd19）與抗體cc52l葉酸腫瘤葉酸受體細胞l甘草次

17、酸肝腫瘤甘草次酸受體細胞l運鐵蛋白腫瘤細胞運鐵蛋白受體l腸道血管活性肽（vip）腫瘤細胞vip受體l半乳糖苷脂肝腫瘤細胞半乳糖受體（二）環境敏感脂質體lph敏感脂質體：磷脂酰乙醇胺、油醇、單硬脂酸衍生物等l溫度敏感脂質體：提高脂質材料的相變溫度；l磁性脂質體：強磁性材料微粉及外加的強磁場。（三）新脂質體l細胞骨架型脂質體：細胞肌球蛋白-脂質體/識別及結合受損細胞破裂位點，并與之融合，傳遞基因或藥物。l血紅蛋白脂質體：peg-脂質體血紅蛋白latp脂質體：生物能量底物/脂質體l細胞穿透肽脂質體：特殊功能病毒蛋白（如hiv-i轉錄激活因子（tat） 兩親性嵌段或接枝共兩親性嵌段或接枝共聚物如聚乳酸

18、聚物如聚乳酸聚乙聚乙二醇共聚物形成增溶二醇共聚物形成增溶膠束與載體應用于靜膠束與載體應用于靜脈、肌肉注射、口服、脈、肌肉注射、口服、眼用等眼用等 cch2 opolylactides ch2 ch2 o polyethylene glycol聚合物膠束由聚合物膠束由可生物相容可生物相容親水區親水區a a與與疏水區疏水區b b組成組成親水段：組成膠束的殼親水段：組成膠束的殼疏水疏水段：組成膠束的核段：組成膠束的核b b 親水部分：親水部分：v聚乙二醇（）、聚羥丙甲丙烯酸酯、葡聚糖聚乙二醇（）、聚羥丙甲丙烯酸酯、葡聚糖疏水部分：疏水部分： v聚酯（聚乳酸，聚羥基乙酸，聚已內酯等）聚酯（聚乳酸，聚羥

19、基乙酸，聚已內酯等）v聚氨基酸（聚聚氨基酸（聚-苯甲酰苯甲酰-l-天冬氨酸、聚天冬氨酸、聚-芐基芐基-l-谷谷氨酸，聚天冬氨酸等）氨酸，聚天冬氨酸等）v聚氧丙烯聚氧丙烯v聚苯乙烯聚苯乙烯l疏水相互作用：疏水鏈段的長度及其與藥物的相容性l靜電相互作用：peg-plys（氨基）核酸（磷酸根）l絡合作用：peg-pasp順鉑l氫鍵作用：peg-pla罌粟堿l吸附作用： 抗腫瘤藥物：抗腫瘤藥物： 紫杉醇紫杉醇 /聚乙二醇聚乙二醇- -聚酯聚酯膠束膠束 阿霉素阿霉素聚聚/ /已二醇已二醇- -聚天冬氨酸聚天冬氨酸膠束膠束抗炎藥物抗炎藥物 吲哚美辛吲哚美辛/聚乙二醇聚（聚乙二醇聚（苯甲酰苯甲酰 天冬氨酸酯

20、膠束天冬氨酸酯膠束鎮靜催眠藥物鎮靜催眠藥物 氯硝西泮氯硝西泮/聚乙二醇聚（聚乙二醇聚（芐基芐基l 谷氨酸酯）膠束谷氨酸酯）膠束抗真菌藥物抗真菌藥物 兩性霉素兩性霉素/b聚乙二醇聚（聚乙二醇聚（苯甲酰苯甲酰 天冬氨酸酯）膠束天冬氨酸酯）膠束精神病藥物精神病藥物 氟哌叮醇氟哌叮醇/聚乙二醇聚氧丙烯膠束聚乙二醇聚氧丙烯膠束雄激素雄激素 二氫睪酮二氫睪酮/聚已內酯聚氧乙烯膠束聚已內酯聚氧乙烯膠束q阿霉素阿霉素/ /聚乙二醇聚乙二醇- -聚天冬氨酸嵌段共聚聚天冬氨酸嵌段共聚物（物（peg-pasppeg-pasp）膠束進入）膠束進入i i期臨床。期臨床。q聚乙二醇聚乙二醇- -聚酯嵌段共聚物膠束增溶難溶

21、聚酯嵌段共聚物膠束增溶難溶性藥物已在我國申請專利。性藥物已在我國申請專利。l親水外層與疏水內核：避免血液調理素破壞；l較低的cmc，較強的耐稀釋性質；l與藥物較強的結合力，可增溶親水或疏水藥物；l粒徑?。洪L循環、避免res系統吞噬；l單分子或多分子膠束：自身穩定性能良好；l與細胞膜的親和能力；l可生物降解性能；l制備簡便v應用優勢：應用優勢：v注射藥物及新型靶向給藥系統的技術平臺注射藥物及新型靶向給藥系統的技術平臺v難溶性藥物增溶，提高生物利用度難溶性藥物增溶，提高生物利用度v藥物在體內滯留時間長，實現靶向給藥藥物在體內滯留時間長，實現靶向給藥 v減少藥物降解，具有一定的緩釋性能減少藥物降解，

22、具有一定的緩釋性能v降低小分子表面活性劑的副作用，提高用藥順應性降低小分子表面活性劑的副作用，提高用藥順應性高分子聚合物膠束的應用領域l1、抗腫瘤藥物的載體l2、難溶性藥物的載體l3、診斷試劑的載體l4、基因傳遞系統高分子膠束載藥常用方法高分子膠束載藥常用方法l高分子膠束的表面修飾：peg-乳糖、plga-peg-葉酸、peg-pla-酪氨酸l環境敏感的高分子膠束：溫敏基團（聚氰基丙烯酸）l高分子-藥物膠束一體化：化學共價結合：聚天冬氨酸（羧基）阿霉素（糖氨基）l 化學改性化學改性殼聚糖殼聚糖 o-o-磺酸基磺酸基-n-n-辛基辛基- -殼聚糖殼聚糖 水水 大分子膠束大分子膠束 難溶性藥物難溶

23、性藥物 難溶性藥物增溶難溶性藥物增溶-(14)-2-氨基氨基-2-脫氧脫氧-d-葡萄糖葡萄糖ooch2ohohnh2nch3(ch2)6chokbh4/h2oooch2ohohnh(ch2)7ch3nooch2oso3hohnh(ch2)7ch3nclso3h/dmfcmc： 0.45 mg/ml（芘熒光探針法） -7-6-5-4-3-2-1012050100150200pyreneintensity of fluorescenceconcentration of carrier(lgc,c=mg/ml)紫杉醇水溶解度紫杉醇水溶解度 (90% (凍干品）凍干品）穩定性：穩定性：4儲藏穩定，儲藏

24、穩定，24個月藥物含量、包封率，膠個月藥物含量、包封率，膠束粒徑不變束粒徑不變, 無泄漏。無泄漏。 blank micelle(200000) taxol loaded micelle (500000) 粒徑：粒徑： 50-300 nm（激光散射法、（激光散射法、tem）釋放度：穩定釋藥，無突釋現象，220 h釋放完全。taxol對照組： 4h釋放60%，22 h釋放完全。 （動態透析法/hplc） 050100150200250020406080100024681012020406080100apaclitaxel release (%)time (h)bapaclitaxel releas

25、e (%)time (h)the in vitro release of paclitaxel from a. cremophore el-based formulation and b. modified chitosan micelle in pbs (0.1 m, ph 7.4) at 37c (n=3).對其它藥物的載藥效果增溶增溶10-hcpt10-hcpt，2.5 mg/ml, , 溶解度溶解度( (原溶解度原溶解度為為0.5 ug/ml) )增加近增加近5000倍倍，且很穩定，不開環。，且很穩定，不開環。增溶增溶多西紫杉醇多西紫杉醇,溶解度達溶解度達 1.5 mg/ml，增加增加

26、(原原溶解度為溶解度為1.2 ug/ml) )1000多倍多倍對對環孢素、尼莫地平也有較好環孢素、尼莫地平也有較好的增溶作用的增溶作用 載體小鼠靜脈注射毒性載體小鼠靜脈注射毒性 ld 50為為315.7 mg/kg 無溶血反應無溶血反應 無過敏性無過敏性 靜脈注射（靜脈注射（i.v.i.v.）用藥組：紫杉醇膠束用藥組：紫杉醇膠束對照組：對照組： taxoltaxol劑量劑量4.84.812.5 mg/kg 12.5 mg/kg （給藥（給藥5 5次）次）紫杉醇膠束紫杉醇膠束4.8-12.5 mg/kg4.8-12.5 mg/kg抑瘤率抑瘤率41.7-66.3 %41.7-66.3 %；taxo

27、l 12.5 mg/kg taxol 12.5 mg/kg 抑瘤率為抑瘤率為50.3 %50.3 %。靜脈注射（靜脈注射（i.v）用藥組：紫杉醇膠束用藥組：紫杉醇膠束對照組對照組: taxol劑量劑量: 12.5mg/kg （給藥（給藥4次）次）紫杉醇膠束抑瘤率紫杉醇膠束抑瘤率6363（t/c=37%t/c=37%）taxol taxol 在相同劑量未見明顯抑瘤作用。在相同劑量未見明顯抑瘤作用。增溶增溶10-hcpt10-hcpt，2.5 mg/ml, , 溶解度溶解度( (原溶解度原溶解度為為0.5 ug/ml) )增加近增加近5000倍倍，且很穩定，不開環。，且很穩定，不開環。增溶增溶多西

28、紫杉醇多西紫杉醇,溶解度達溶解度達 1.5 mg/ml，比原來，比原來增加增加(原原溶解度為溶解度為1.2 ug/ml) )1000多倍多倍對對環孢素、尼莫地平也有較好環孢素、尼莫地平也有較好的增溶作用的增溶作用排泄與代謝l靜脈注射大鼠，膽汁排泄，尿糞排泄結果見表1，2，3。7天內尿糞累計排泄85。36h內膽汁排泄36。（同位素標記） 1、殼聚糖衍生物及其制備方法與在制藥中的應用 patent: cn 03112981.12、燈盞花素脂質體及其凍干粉針的制備方法，patent03113037 cn, 授權3、喜樹堿衍生物脂肪乳劑及其制備方法，cn 200410041190.93、can zha

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