實驗室檢測常用方法及特點一、稱量法二、色譜法三、光譜法四、樣品預處理五、校準曲線的要求稱量法實驗室一般的分析稱量方法有以下幾種：1、直接稱量法2、增量法3、減量法4、指定法1、直接稱量法稱量物體，如燒杯、外表皿、坩堝等，一般采用直接稱量法。即用砝碼直接與被稱物平衡，此時砝碼的重量就是被稱物的重量。所稱固體試樣如果沒有吸濕性并在空氣中是穩定的，可用直接稱量法。

方法如下：用一條干凈的紙條拿取被稱物放入天平的稱量盤，然后去掉紙條，在砝碼盤上加砝碼。此時，砝碼所標示的重量就等于被稱物的重量。2、增量法3、減量法此法一般用來連續稱取幾個試樣，其量允許在一定范圍內波動，也用于稱取易吸濕、易氧化或易與二氧化碳反響的試樣。此法稱取固體試樣的方法為：將適量試樣裝入稱量瓶中，稱得稱量瓶及試樣重量為Ｗ1，然后將稱量瓶，從天平盤上取出，舉放于容器上方，瓶口向下稍傾，捏住稱量瓶蓋，輕敲瓶口上部，使試樣慢慢落入容器中，當傾出的試樣已接近所需要的重量時，慢慢地將稱量瓶豎起，再用稱量瓶蓋輕敲瓶口下部，使瓶口的試樣集中到一起，蓋好瓶蓋，放回到天平盤上稱量，得Ｗ2ｇ，兩次稱量之差就是試樣的重量。如此繼續進行，可稱取多份試樣。如果一次倒入容器的藥品太多，必須棄去重稱，切勿放回稱量瓶。如果倒入的試樣不夠可再加一次，但次數宜少。

第一份：

試樣重＝Ｗ1－Ｗ2〔ｇ〕第二份：

試樣重＝Ｗ2－Ｗ3〔ｇ〕4、指定法對于性質比較穩定的試樣，有時為了便于計算，那么可稱取指定質量的樣品。用指定法稱量時，在天平盤的兩邊各放一塊外表皿(它們的質量盡量接近)，調節天平的平衡點在中間刻度左右，然后在左邊天平盤內加上固定質量的砝碼，在右邊天平盤內加上試樣(這樣取放試樣比較方便)，直至天平的平衡點到達原來的數值，這時，試樣的質量即為指定的質量。電子天平使用方法1．檢查并調整天平至水平位置。2．事先檢查電源電壓是否匹配(必要時配置穩壓器)，按儀器要求通電預熱至所需時間。3．預熱足夠時間后翻開天平開關，天平那么自動進行靈敏度及零點調節。待穩定標志顯示后，可進行正式稱量。4．稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上，關上側門，輕按一下去皮鍵，天平將自動校對零點，然后逐漸參加待稱物質，直到所需重量為止。5．被稱物質的重量是顯示屏左下角出現“→〞標志時，顯示屏所顯示的實際數值。6．稱量結束應及時除去稱量瓶(紙)，關上側門，切斷電源，并做好使用情況登記。色譜法〔GC1690氣相色譜儀〕一、氣相色譜法的特點二、氣相色譜法的原理三、相關操作的本卷須知二、氣相色譜法的原理色譜定量分析的依據是被測物的量與它在色譜圖上的峰面積〔或峰高〕成正比。職業病危害因素檢測檢驗定量分析一般采用標準曲線法。標準曲線法，亦稱外標法。首先用純物質配置一系列不同濃度的標準試樣，在一定的色譜條件下準確定量進樣，測量峰面積〔或峰高〕，繪制標準曲線。外標法不使用校正因子，準確性較高，操作條件變化對結果準確性影響較大，對進樣量的準確性控制要求較高，適用于大批量試樣的快速分析。三、相關操作的本卷須知１、開機到檢測〔約45分鐘〕先打氮氫空一體機發生器電源，大約15分鐘后，待各壓力表壓力穩定在0.4MP左右，同時查看毛細氣路控制器“柱前壓〞，如果壓力表有0.1MP壓力，可翻開儀器開關電源。并且按“起始〞鍵。７、進樣待基線走平穩后將HD-D熱解吸儀氣流控制開關關閉，用微量注射器吸取樣品，進樣。吸取樣品時應確保注射器內無多余的氣泡；待樣品熱解吸10~60S，將切換閥切換至“解吸〞處。按GC-1690主機“起始〞按鈕。同時按鍵盤“F5〞或鼠標點擊“采集數據〞。觀察GC-1690主機顯示屏上的信息，待解吸完畢后將切換閥切換至“反吹〞狀態，并將熱解吸儀氣流控制開關翻開。進樣完畢，等待出峰。８、保存圖譜保存圖譜：待所有峰都檢測出來后，按GC-1690氣相色譜儀“停止〞按鈕；N2000工作站繼續采集數據1~10min，在電腦上用鼠標點擊“停止采集〞。實驗圖譜會自動保存于設定的文件夾內。到此，一個進樣實驗完成。假設再次進樣，等待柱箱溫度下降至柱箱初溫5~10min后，再次按上述流程進樣。10、氣相色譜柱溫的選擇考慮到每種固定液都有一定的溫度范圍。柱溫不能高于固定液的最高使用溫度，否那么固定液因揮發而流失。應從別離的角度出發，權衡利弊，柱溫的選擇原那么為：在對最難別離的物質對保持較好別離度的前提下，盡可能采用較高柱溫，但以保存時間適宜、峰形不拖尾為度。光譜法根據我們實驗室常用的光譜法有以下三種：紫外-可見分光光度法原子吸收分光光度法原子熒光分光光度法紫外-可見分光光度法一、根本原理二、分析條件的選擇三、分析方法及本卷須知一、根本原理

紫外-可見分光光度法——根據被測物質在紫外-可見光的特定波長處或一定波長范圍內對光的吸收特性而對該物質進行定性、定量分析的方法稱紫外-可見分光光度法。將不同波長的單色光依次通過一定濃度的同一溶液，分別測定吸收度，然后以吸收度為縱坐標，波長為橫坐標畫圖可得到一條吸收曲線即吸收光譜。曲線顯示了物質對不同波長光的吸收情況，曲線上吸收值最大處所對應的波長稱最在吸收波長，用λ表示，最大吸收波長在定量分析中常用來作測定波長。紫外-可見分光光度法是工作場所職業病化學危害因素檢測中的常用方法。具有靈敏度高，測量精度好，操作簡便等優點。通常，待測物質含量為1%~0.00001%時，能夠用分光光度法準確測定，所以它主要用于測定微量組分，幾乎所有的無機離子和許多有機化合物均可以用分光光度法進行測定。假設采用靈敏度高、選擇性好的有機顯色劑，并參加適當掩蔽劑，一般不經過別離即可直接進行分光光度法測定，其方法的相對誤差為5%~10%。紫外-可見分光光度法的定量依據是朗伯-比爾定律，即在一定條件下溶液對單色吸收的強弱與吸光物質的濃度和厚度成正比關系。其數學表達式為：A=KCL式中A——溶液吸光度；K——吸光常數〔摩爾吸光常數〕，L/(mol·cm)；C——溶液濃度，mol/L；L——液層厚度〔比色皿厚度〕，cm。吸光系數K在給定條件下〔單色光波長、溶劑、溫度等〕是物質的特征常數，可作為定性依據。在吸收度與濃度之間的直線關系中，吸光系數K是斜率，是定量的依據，其數值越大那么測定的靈敏度越高。二、分析條件的選擇我們實驗室的722S可見分光光度計其工作波長范圍為325~1020nm。該儀器的主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號顯示系統五個局部構成。1、儀器測量條件的選擇適宜的吸光度范圍入射光波長的選擇狹縫寬度的選擇2、顯色反響條件的選擇對多種物質進行測定，常利用顯色反響將被測組分轉變為在一定波長范圍有吸收的物質。常見的顯色反響有配位反響、氧化復原反響等。顯色反響必須滿足的反響條件有：(1)反響生成物須在紫外-可見光區有較強吸光能力，即摩爾吸光系數較大。(2)反響有較高的選擇性，即被測組分生成化合特吸收曲線應與共存物質的吸收光譜有明顯的差異。(3)反響產物應足夠穩定，以保證測量過程中溶液的吸光度不變。(4)反響產物組成恒定。3、參比溶液的選擇測定樣品溶液的吸光度，需先用參比溶液調節透光度〔吸光度為0〕為100%，消除其他成分及吸光池和溶劑等對光的反射和吸收帶來測定誤差。三、分析方法及本卷須知目視比色法用眼睛觀察、比較溶液顏色深度以確定物質含量的方法稱為目視比色法。標準曲線法根據朗伯-比爾定律，保持液層厚度，入射光波長和其他測量條件也不變，那么在一定濃度范圍內，所測得吸光度與溶液中待測物質濃度成正比。樣品檢測本卷須知在進行樣品檢測與分析過程中，不能不考慮試劑和顯色條件對檢測的影響，需要注意以下幾點：〔1〕顯色劑質量，注意其使用期限、保存方式〔低溫、避光、枯燥〕、顯色劑純度的區別和要求，盡量使用有效期限和方法要求的試劑純度。〔2〕遵照實驗要求，注意反響溫度和時間等控制條件。〔3〕注意顯色的穩定時間，并在其穩定時間內進行檢測。〔4〕使用試劑分級和質量，按檢測要求使用。〔5〕對被檢樣品的干擾物質和干擾因素進行排除，必要時進行復檢。原子吸收分光光度法一、根本原理二、原子吸收光譜法的特點三、儀器的組成四、儀器條件的選擇一、根本原理1、原子吸收光譜法利用原子對固有波長光的吸收進行測定。〔被測元素基態原子在蒸氣狀態對其原子共振輻射的吸收進行元素定量分析〕基態原子吸收其共振輻射，外層電子由基態躍遷至激發態而產生原子吸收光譜。2、在實際工作中，對于原子吸收值的測量，是以一定光強的單色光I0通過原子蒸氣，然后測出被吸收后的光強I，此一吸收過程符合朗伯-比耳定律，即I=I0e-KNL式中K為吸收系數，N為自由原子總數〔基態原子數〕，L為吸收層厚度。吸光度A可用下式表示A=lgI0/I=2.303KNL在實際分析過程中，當實驗條件一定時，N正比于待測元素的濃度。二、原子吸收光譜法的特點1、檢出限低，靈敏度高。2、分析精度好。3、選擇性好。4、應用范圍廣，可測定70多個元素。5、分析速度快，操作方便。6、儀器比較簡單，一般實驗室可配備。三、儀器的組成四、儀器條件的選擇原子熒光分光光度法一、根本原理與特點二、儀器的組成三、分析方法及干擾消除一、根本原理與特點根本原理氣態自由原子吸收光源的特征輻射后，原子的外層電子躍遷到較高能級，然后又躍遷返回基態或較低能級，同時發射出與原激發輻射波長相同或不同的輻射即為原子熒光。原子熒光屬光致發光，也是二次發光。原子熒光光譜法是以原子在輻射能激發下發射的熒光強度進行定量分析的發射光譜分析法。原子熒光光譜法的優點1、檢出限低，靈敏度高；2、干擾較少，譜線比較簡單；3、分析校準曲線線性范圍寬，可達3~5個數量級；4、由于原子熒光是向空間各個方向發射的，較易制作多道儀器而實現多元素同時測定。二、儀器的組成原子熒光光譜儀與原子吸收分光光度計的構造大致相同，其主要區別于原子吸收分光光度計的銳線光源、原子化器、單色器和檢測系統位于同一條直線上，而原子熒光光譜儀的銳線光源、原子化器、單色器和檢測系統處于直角狀態。因為只有這樣，才能防止光源的輻射進入單色器和檢測系統，影響熒光信號的檢測。原子熒光光譜儀分為色散型和非色散型兩類。光源——透鏡——原子化器——單色器——檢測器三、分析方法及干擾消除樣品預處理方法石化過程分析工業衛生調查和評價藥物動力學和毒理學研究食品分析職業病危害因素分析色譜法應用醫療診斷核能和燃料分析制藥過程監測化裝品和香料組成分析商品質量檢驗樣品預處理的目的除去微粒減少干擾雜質濃縮微量的組份提高檢測的靈敏度及選擇性改善別離的效果有利于色譜柱及儀器的保護2、樣品處理的必要性和重要性占樣品分析時間的比例〔>60%〕樣品預處理所用時間遠大于色譜別離的時間占分析的消耗總本錢最大消耗大量的溶劑及其他化學品實驗的重復性及準確性最差的環節影響實驗結果好壞的最重要因素

是決定性的步驟3、樣品處理的原那么〔1〕樣品中可能存在的物質組成？濃度水平？〔2〕樣品中的主要組分？〔3〕采樣方法是非破壞性的還是破壞性的？〔4〕收集的樣品必須有代表性。〔5〕采用方法必須和分析目的保持一致。〔6〕樣品制備過程中盡可能防止和防止待測定組分發生化學變化或喪失3、樣品處理的原那么〔續〕〔7〕樣品處理中，假設進行待測定組分的化學反響，那么反響應是的和定量完成的。〔8〕樣品制備過程中，要防止和防止待測定組分受到污染，減少無關化合物引入制備過程。〔9〕處理過程應簡單易行，所用樣品處理裝置的尺寸應與處理樣品的量相適應。〔10〕采用后應盡可能快的進行分析樣品的制備和分析，或使用適當的方法消除可能產生的干擾，做好樣品的保存。二、樣品的采集氣體〔包括蒸汽〕涉及的樣品形式氣溶膠〔霧、煙、粉塵〕

直接采樣法主要采集方法有泵型采樣法無泵型采樣法直接采樣法：只需將樣品直接引進容器中，所用容器最好是新的或洗凈后枯燥的，以防止其他樣品的殘留影響。有泵型采樣法：又稱動力采樣法，是用空氣采樣器〔有電動抽氣泵和流量計組成〕作為抽氣動力，將樣品空氣抽過樣品收集器，空氣中的待測物被樣品收集器采集下來，供測定用。無泵型采樣法：無泵型采樣法也叫擴散采樣法，采集空氣中化學物質時，不需要抽氣動力和流量裝置，而是根據費克(Fick)擴散定律，利用化學物質分子在空氣中的擴散作用完成采樣的。使用采集方法的本卷須知〔1〕采集的樣品應具有代表性，要注意采樣的時間、地點及采樣位置的選擇。〔2〕所有樣品都要采集雙份，一份分析樣品，一份保存樣品，備復查時使用。〔3〕樣品的采集和儲存過程要作記錄，詳列采樣時間、地點、準確位置等。〔4〕采集儲存中待測組分不應有損失或發生化學變化。損失—包括揮發、在儲存容器上的吸附等物理原因化學變化——包括被氧化、微生物引起的分解、各組分間的化學反響等〔5〕防止樣品受到外界污染。〔6〕采集后要盡快進行分析樣品的制備和分析。三、樣品預處理常用的方法樣品預處理的過程去除微粒過濾過濾膜/過濾裝置有機(0.5m)/無機(0.45m)膜片可更換一次性使用的膜使用方便簡單，交叉污染小有更小內徑，可用于微量樣品的處理高速離心大于：10,000g超濾選擇性沉淀常用于生化樣品中除蛋白有機溶劑乙腈，甲醇強酸三氯乙酸，過氯酸鹽50%硫酸銨10%TCA樣品衍生提高檢測的靈敏度增加紫外基團以增強紫外檢測的靈敏度增加熒光基團使樣品用高靈敏度熒光檢測器改變別離的選擇性改變組份的基團，如：變離子型化合物為非離子型，用反相方法別離典型的例子氨基酸分析加速溶劑萃取〔ASE〕三種不同型號的ASEASE100↑ASE200↓ASE300↑ASE的突出優點快速，15分鐘溶劑用量少萃取效率高樣品基體影響小可同時選用四種溶劑萃取平安，全自動ASE建立了環境,藥物,聚合物,食品,和化裝品工業的大量應用ASE工作流程加溶劑時間(min) 0.5–1加樣品靜態萃取5氮氣吹掃 1–2溶劑泵吹掃閥爐體氮氣瓶靜態閥收集瓶萃取池循環加熱 5加壓萃取結束Total(min)準備分析 12–18新溶劑沖洗 0.5ASE

的應用領域環境農業、食品聚合物制藥濃縮樣品濃縮樣品的方法

萃取/吹干

沉淀/再溶解

色譜法

液固抽提/固相萃取小柱

四、導致待測物損失的因素

化學降解：原因：?樣品的化學和生物學不穩定性常引起化學分解?光化學及熱穩定性〔尤其在凈化步驟中強酸、強堿的中和所產生的熱〕引起的損失，也應加注意。解決方法：盡量采用溫和條件制備樣品，經免引起待測物的局部分解、開環等情況發生，有的樣品尚需避光操作衍生化反響：?由于不完全反響，待測樣品僅局部轉化為所需的產物或形成副產物?有時在蒸發除去過量衍生化試劑時，使得衍生物與溶劑形成共沸混合物而導致損失絡合：

某些樣品會與重金屬離子絡合，這種情況雖較少遇到，但往往是某些樣品制備中損失的一個因素。

溶劑中雜質原因：?由于溶劑體積較其它試劑為大，即使原來雜質濃度較低，濃集時或通過色譜柱時，濃度顯著增大而干擾測定。?更嚴重的是干擾物在每批溶劑或試劑中有所不同，而影響不